| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 缩写符号 | 第13-14页 |
| 表格索引 | 第14-15页 |
| 图形索引 | 第15-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-38页 |
| 1 转谷氨酰胺酶研究进展 | 第18-28页 |
| ·转谷氨酰胺酶的来源 | 第18-19页 |
| ·转谷氨酰胺酶的生产方法 | 第19-23页 |
| ·动植物组织提取法 | 第20页 |
| ·微生物发酵生产法 | 第20页 |
| ·基因克隆方法 | 第20-21页 |
| ·微生物转谷氨酰胺酶(MTG)的生产研究历史 | 第21-23页 |
| ·微生物转谷氨酰胺酶(MTG)的主要理化性质 | 第23-24页 |
| ·转谷氨酰胺酶的结构分析 | 第24-26页 |
| ·转谷氨酰胺酶的催化机理及测定方法 | 第26-27页 |
| ·转谷氨酰胺酶的在食品工业的应用 | 第27-28页 |
| ·肉制品加工中的应用 | 第27页 |
| ·在烘焙食品中的应用 | 第27页 |
| ·乳制品加工中的应用 | 第27-28页 |
| ·水产品加工中的应用 | 第28页 |
| ·在食品包装及保藏中的应用 | 第28页 |
| 2 转谷氨酰胺酶的基因克隆和表达研究进展 | 第28-30页 |
| 3 大肠杆菌表达系统的概述 | 第30-33页 |
| ·大肠杆菌表达系统的优点 | 第30页 |
| ·大肠杆菌表达系统的缺点 | 第30-31页 |
| ·各种类型大肠杆菌表达系统的构成及特点 | 第31-32页 |
| ·Lac和Tac表达系统 | 第31页 |
| ·PL和PR表达系统 | 第31页 |
| ·T7表达系统 | 第31-32页 |
| ·大肠杆菌表达系统研究进展 | 第32-33页 |
| 4 本研究的目的意义及内容 | 第33-34页 |
| ·研究目的意义 | 第33页 |
| ·研究内容 | 第33-34页 |
| 参考文献 | 第34-38页 |
| 第二章 产转谷氨酰胺酶菌株的筛选 | 第38-46页 |
| 1 材料与方法 | 第38-41页 |
| ·材料 | 第38-39页 |
| ·土壤 | 第38页 |
| ·主要仪器 | 第38-39页 |
| ·主要试剂 | 第39页 |
| ·培养基 | 第39页 |
| ·方法 | 第39-41页 |
| ·初筛 | 第39页 |
| ·初筛的原理 | 第39-40页 |
| ·复筛的原理 | 第40页 |
| ·测定酶活试剂A液和B液的配制 | 第40页 |
| ·测定酶活的标准曲线 | 第40-41页 |
| ·测定酶活 | 第41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-43页 |
| ·初筛的结果 | 第41-42页 |
| ·测酶活的标准曲线 | 第42页 |
| ·复筛 | 第42-43页 |
| 3 讨论 | 第43-44页 |
| 4 小结 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-46页 |
| 第三章 转谷氨酰胺酶产生菌St4的初步鉴定 | 第46-60页 |
| 1 材料与方法 | 第46-52页 |
| ·材料 | 第46-48页 |
| ·菌种 | 第46页 |
| ·主要仪器 | 第46页 |
| ·主要试剂 | 第46-47页 |
| ·培养基 | 第47页 |
| ·溶液配制 | 第47-48页 |
| ·方法 | 第48-52页 |
| ·形态特征 | 第48页 |
| ·培养特征 | 第48页 |
| ·生理生化实验 | 第48-49页 |
| ·16SrDNA序列分析 | 第49-52页 |
| 2 结果与分析 | 第52-57页 |
| ·形态学特征,培养特征和生理生化特性结果 | 第52-53页 |
| ·形态特征 | 第52页 |
| ·培养特征和生理生化特征 | 第52-53页 |
| ·16SrDNA序列结果 | 第53-55页 |
| ·液氮研磨法提取放线菌基因组DNA | 第54页 |
| ·16SrDNA基因的扩增结果 | 第54-55页 |
| ·回收后的16SrDNA与克隆载体连接和连接产物的转化 | 第55页 |
| ·提取重组质粒 | 第55页 |
| ·16SrDNA测序结果 | 第55页 |
| ·构建系统发育树 | 第55-57页 |
| 3 讨论 | 第57-58页 |
| 4 小结 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-60页 |
| 第四章 Streptomyces hygroscopicus St4转谷氨酰胺酶基因的克隆及序列分析 | 第60-76页 |
| 1 材料与方法 | 第60-65页 |
| ·材料 | 第60-63页 |
| ·菌株与质粒 | 第60页 |
| ·主要仪器 | 第60-61页 |
| ·主要试剂 | 第61页 |
| ·溶液配制 | 第61页 |
| ·PCR引物 | 第61-63页 |
| ·培养基 | 第63页 |
| ·方法 | 第63-65页 |
| ·吸水链霉菌总DNA提取 | 第63页 |
| ·紫外光谱分析法测定DNA纯度 | 第63页 |
| ·SiteFinding-PCR扩增目的基因MTG | 第63-64页 |
| ·PCR产物与载体pMD19-T的连接 | 第64-65页 |
| ·大肠杆菌感受态制备 | 第65页 |
| ·载体pMD19-T连接产物转化大肠杆菌感受态细胞 | 第65页 |
| ·PCR产物的克隆、鉴定 | 第65页 |
| 2 结果与分析 | 第65-73页 |
| ·吸水链霉菌总DNA提取 | 第65页 |
| ·转谷氨酰胺酶基因的扩增、PCR产物的克隆、鉴定及序列测定 | 第65-71页 |
| ·MTG基因内部片段的扩增、PCR产物的克隆、鉴定及序列测定 | 第65-66页 |
| ·Site-finding PCR方法扩增转谷氨酰胺酶基因上下游序列 | 第66-70页 |
| ·MTG基因全长的扩增、PCR产物的克隆、鉴定及序列测定 | 第70-71页 |
| ·吸水链霉菌转谷氨酰胺酶基因序列分析 | 第71-73页 |
| 3 讨论 | 第73-74页 |
| 4 小结 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-76页 |
| 第五章 转谷氨酰胺酶基因mtg在大肠杆菌中的表达及发酵条件优化 | 第76-92页 |
| 1 材料与方法 | 第77-83页 |
| ·材料 | 第77-79页 |
| ·主要仪器和试剂 | 第77页 |
| ·质粒与菌株 | 第77页 |
| ·PCR引物 | 第77页 |
| ·培养基 | 第77-78页 |
| ·试剂的配制 | 第78-79页 |
| ·方法 | 第79-83页 |
| ·重组工程菌的构建 | 第79-81页 |
| ·目的基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第81-82页 |
| ·BL21/pET-23(a)-mtg表达条件的优化 | 第82-83页 |
| ·表达产物Ni-NTA亲和层析纯化 | 第83页 |
| 2 结果与分析 | 第83-89页 |
| ·BL21/pET-23(a)-mtg(pET-32(a)-mtg)重组质粒的构建 | 第83-85页 |
| ·目的基因PCR扩增 | 第83-84页 |
| ·pET-23(a),pET-32(a)载体和目的基因的制备 | 第84页 |
| ·pET-23(a),pET-32(a)载体和目的基因的连接及鉴定 | 第84-85页 |
| ·mtg在大肠杆菌中的诱导表达 | 第85-89页 |
| ·重组质粒稳定性检测 | 第85页 |
| ·重组菌体表达产物的SDS-PAGE分析及酶活测定 | 第85-86页 |
| ·BL21/pET-23(a)-mtg表达条件的优化 | 第86-89页 |
| ·表达产物Ni-NTA亲和层析纯化及融合蛋白配体的酶切 | 第89页 |
| 3 讨论 | 第89-90页 |
| 4 小结 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-92页 |
| 全文结论 | 第92-94页 |
| 论文创新点 | 第94-96页 |
| 致谢 | 第96页 |
