| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 前言 | 第10-11页 |
| 第一章 综述 | 第11-20页 |
| 1.1 维生素C一步发酵体系构建模式研究 | 第11-13页 |
| 1.1.1 K. vulgare和G. oxydans菌种配合一步发酵模式研究 | 第11-12页 |
| 1.1.2 芽孢杆菌对K. vulgare和G. oxydans菌种的影响 | 第12-13页 |
| 1.2 外源物质对K. vulgare和G. oxydans菌种发酵影响 | 第13-15页 |
| 1.2.1 GSH添加对一步发酵作用研究 | 第13-14页 |
| 1.2.2 其它外源物质对维生素C发酵的影响 | 第14-15页 |
| 1.3 芽孢杆菌分子操作研究进展及分子开关构建 | 第15-17页 |
| 1.3.1 芽孢杆菌分子操作研究 | 第15-16页 |
| 1.3.2 分子开关研究 | 第16-17页 |
| 1.4 本研究课题研究意义和内容 | 第17-20页 |
| 1.4.1 研究意义 | 第17-18页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第18-20页 |
| 第二章 材料与方法 | 第20-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-24页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第20-21页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.4 培养基 | 第23-24页 |
| 2.2 菌株改造 | 第24-28页 |
| 2.2.1 引物设计 | 第24页 |
| 2.2.2 芽孢杆菌基因组提取 | 第24-25页 |
| 2.2.3 芽孢杆菌质粒提取 | 第25-26页 |
| 2.2.4 普通琼脂糖凝胶DNA回收 | 第26页 |
| 2.2.5 大肠杆菌转化 | 第26-27页 |
| 2.2.6 芽孢杆菌电转化 | 第27-28页 |
| 2.2.7 芽孢杆菌原生质体转化 | 第28页 |
| 2.3 菌种发酵及检测 | 第28-33页 |
| 2.3.1 菌株培养条件 | 第28-29页 |
| 2.3.2 显微镜观察菌体形态 | 第29页 |
| 2.3.3 代谢组学实验与分析方法 | 第29-30页 |
| 2.3.4 荧光定量PCR法 | 第30-33页 |
| 第三章 谷胱甘肽等调节因子对VC一步发酵的影响 | 第33-45页 |
| 3.1 GSH添加对单菌的影响 | 第33-34页 |
| 3.2 菌种接种比例优化 | 第34-36页 |
| 3.3 GSH添加对K. vulgare和G. oxydans混菌的影响 | 第36-37页 |
| 3.4 GSH对两菌营养环境变化分析 | 第37-40页 |
| 3.5 GSH对混菌作用机制分析 | 第40-42页 |
| 3.6 硫辛酸等调节因子对K. vulgare和G. oxydans作用 | 第42-45页 |
| 第四章 三菌种一步发酵体系研究与构建 | 第45-55页 |
| 4.1 三菌一步发酵体系构建 | 第45-52页 |
| 4.1.1 G. oxydans单菌生长特性 | 第45-46页 |
| 4.1.2 K. vulgare单菌生长特性 | 第46-49页 |
| 4.1.3 芽孢杆菌对K. vulgare的伴生作用 | 第49-50页 |
| 4.1.4 芽孢杆菌在以D-山梨醇为底物的生长特性 | 第50-51页 |
| 4.1.5 K. vulgare菌及其伴生菌对山梨醇的消耗 | 第51页 |
| 4.1.6 三菌混菌发酵体系构建 | 第51-52页 |
| 4.2 三菌混菌一步发酵体系优化研究 | 第52-53页 |
| 4.2.1 分批发酵研究 | 第52-53页 |
| 4.2.2 补料发酵研究 | 第53页 |
| 4.3 三菌发酵小结 | 第53-55页 |
| 第五章 维生素C一步发酵辅助菌株芽孢杆菌改造 | 第55-71页 |
| 5.1 芽孢杆菌电转方法的建立与优化 | 第55-56页 |
| 5.2 山梨醇脱氢酶的过表达 | 第56-60页 |
| 5.2.1 山梨醇脱氢酶模块构建 | 第56-59页 |
| 5.2.2 模块效用研究 | 第59-60页 |
| 5.3 山梨醇脱氢酶基因的敲除 | 第60-66页 |
| 5.3.1 重组载体构建 | 第60-65页 |
| 5.3.2 敲除后菌株代谢研究 | 第65-66页 |
| 5.4 诱导裂解模块构建 | 第66-70页 |
| 5.4.1 IPTG诱导裂解模块构建 | 第67页 |
| 5.4.2 木糖诱导裂解模块构建 | 第67页 |
| 5.4.3 光诱导模块构建 | 第67-68页 |
| 5.4.4 各裂解模块效用 | 第68-70页 |
| 5.5 小结 | 第70-71页 |
| 第六章 结论与展望 | 第71-73页 |
| 6.1 结论 | 第71页 |
| 6.2 展望 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-78页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
