| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-18页 |
| 1.1 木聚糖及其水解 | 第9-11页 |
| 1.1.1 木聚糖组成和结构 | 第9-10页 |
| 1.1.2 木聚糖的水解 | 第10页 |
| 1.1.3 木聚糖水解酶 | 第10-11页 |
| 1.2 木聚糖酶和木糖苷酶分类与来源 | 第11-14页 |
| 1.2.1 木聚糖酶和木糖苷酶的分类 | 第11-12页 |
| 1.2.2 木聚糖酶和木糖苷酶的来源 | 第12-14页 |
| 1.3 木聚糖酶和木糖苷酶异源表达 | 第14-16页 |
| 1.3.1 木聚糖酶表达 | 第14-15页 |
| 1.3.2 木糖苷酶表达 | 第15-16页 |
| 1.4 本论文研究意义和主要研究内容 | 第16-18页 |
| 1.4.1 本论文研究意义 | 第16-17页 |
| 1.4.2 本论文主要研究内容 | 第17-18页 |
| 第二章 材料与方法 | 第18-25页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-19页 |
| 2.1.1 菌株和载体及基因 | 第18页 |
| 2.1.2 培养基 | 第18页 |
| 2.1.3 仪器设备和试剂 | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-24页 |
| 2.2.1 目的基因优化 | 第19页 |
| 2.2.2 重组毕赤酵母构建 | 第19-21页 |
| 2.2.3 重组毕赤酵母的培养 | 第21页 |
| 2.2.4 重组酶分离纯化及酶学性质分析 | 第21-23页 |
| 2.2.5 重组毕赤酵母发酵优化 | 第23-24页 |
| 2.3 分析方法 | 第24-25页 |
| 2.3.1 生物量测定 | 第24页 |
| 2.3.2 酶活性测定 | 第24页 |
| 2.3.3 蛋白含量测定 | 第24页 |
| 2.3.4 琼脂糖凝胶电泳和SDS-PAGE | 第24-25页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第25-55页 |
| 3.1 重组毕赤酵母的构建 | 第25-34页 |
| 3.1.1 木聚糖酶和木糖苷酶基因优化 | 第25-27页 |
| 3.1.2 表达载体构建 | 第27-28页 |
| 3.1.3 单质粒重组菌株构建 | 第28-29页 |
| 3.1.4 双质粒重组菌株构建 | 第29-33页 |
| 3.1.5 双质粒重组菌株产酶分析 | 第33-34页 |
| 3.1.6 小结 | 第34页 |
| 3.2 重组酶分离纯化及酶学性质分析 | 第34-41页 |
| 3.2.1 重组酶的纯化 | 第35-37页 |
| 3.2.2 重组酶最适反应温度和热稳定性测定 | 第37页 |
| 3.2.3 重组酶最适pH和pH稳定性测定 | 第37-38页 |
| 3.2.4 金属离子及有机溶剂和活性剂对重组酶酶活的影响 | 第38-39页 |
| 3.2.5 重组酶对底物和产物的性能测定 | 第39-40页 |
| 3.2.6 木聚糖酶和木糖苷酶动力学参数测定 | 第40-41页 |
| 3.2.7 小结 | 第41页 |
| 3.3 重组毕赤酵母摇瓶发酵优化 | 第41-50页 |
| 3.3.1 发酵培养基及组分优化 | 第41-43页 |
| 3.3.2 诱导初始pH和初始诱导时间对重组酶产量的影响 | 第43-44页 |
| 3.3.3 接种量和甲醇补加量对重组酶产量的影响 | 第44-45页 |
| 3.3.4 温度和摇床转速对重组酶产量的影响 | 第45-46页 |
| 3.3.5 添加物对重组酶产量的影响 | 第46-47页 |
| 3.3.6 摇瓶发酵关键因素正交实验 | 第47-50页 |
| 3.3.7 小结 | 第50页 |
| 3.4 重组毕赤酵母5L罐发酵实验 | 第50-55页 |
| 3.4.1 甘油培养阶段 | 第50-51页 |
| 3.4.2 木聚糖酶5L罐实验 | 第51-53页 |
| 3.4.3 木糖苷酶5L罐实验 | 第53-54页 |
| 3.4.4 小结 | 第54-55页 |
| 主要结论与展望 | 第55-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 附录 | 第64-67页 |
| 附录 1：本论文所涉及的相关基因 | 第64-67页 |
| 附录 2：作者在攻读硕士期间发表的论文 | 第67页 |