| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-18页 |
| ·谷氨酰胺转胺酶概述 | 第10-13页 |
| ·谷氨酰胺转胺酶催化特性及来源 | 第10页 |
| ·谷氨酰胺转胺酶的应用 | 第10-11页 |
| ·链霉菌谷氨酰胺转胺酶的活化机制 | 第11页 |
| ·谷氨酰胺转胺酶的作用机制 | 第11-12页 |
| ·重组谷氨酰胺转胺酶的生产 | 第12-13页 |
| ·解脂耶氏酵母表达系统 | 第13-15页 |
| ·解脂耶氏酵母简介 | 第13-14页 |
| ·解脂耶氏酵母表达系统 | 第14-15页 |
| ·蛋白质糖基化 | 第15-16页 |
| ·蛋白质糖基化的形成 | 第15页 |
| ·糖基化对酶蛋白质结构和性质的影响 | 第15-16页 |
| ·蛋白质的去糖基化 | 第16页 |
| ·立题依据及意义 | 第16-17页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第17-18页 |
| 第二章 S. hygroscopicus pro-TGase 在 Yarrowia lipolytica 中的分泌表达和发酵优化 | 第18-33页 |
| ·前言 | 第18页 |
| ·材料与方法 | 第18-22页 |
| ·菌株与质粒 | 第18页 |
| ·试剂和仪器 | 第18-19页 |
| ·培养基与培养条件 | 第19页 |
| ·DNA 操作 | 第19-20页 |
| ·S. hygroscopicus pro-TGase 基因的克隆 | 第20-21页 |
| ·重组菌基因组验证 | 第21页 |
| ·表达载体 pINA1296/pro-TGase 和 pINA1297/pro-TGase 的构建与转化 | 第21页 |
| ·N-糖基化位点突变体质粒的构建与转化 | 第21-22页 |
| ·分析方法 | 第22页 |
| ·结果与讨论 | 第22-31页 |
| ·表达载体 pINA1296/pro-TGase 和 pINA1297/pro-TGase 的构建 | 第22-23页 |
| ·重组酵母的构建与 pro-TGase 的分泌表达 | 第23-26页 |
| ·N-糖基化位点突变表达载体的构建 | 第26页 |
| ·重组酵母菌 N-糖基化位点突变体的构建与 pro-TGase 的表达 | 第26页 |
| ·碳源对突变体 N355Q 产量的影响 | 第26-28页 |
| ·氮源对突变体 N355Q 产量的影响 | 第28页 |
| ·无机盐对突变体 N355Q 产量的影响 | 第28页 |
| ·pH 对突变体 N355Q 产量的影响 | 第28-29页 |
| ·发酵培养基的正交设计优化 | 第29-31页 |
| ·3 L 罐突变体 N355Q 的发酵生产 | 第31页 |
| ·本章小结 | 第31-33页 |
| 第三章 S. hygroscopicus TGase 基因在 Y. lipolytica 中的活性表达 | 第33-42页 |
| ·前言 | 第33页 |
| ·材料与方法 | 第33-37页 |
| ·菌株和质粒 | 第33页 |
| ·培养基 | 第33页 |
| ·试剂和仪器 | 第33页 |
| ·DNA 操作 | 第33-34页 |
| ·TGase 与其酶原区共表达载体的构建与转化 | 第34-37页 |
| ·插入蛋白酶 Kex2 识别位点的突变体质粒的构建与转化 | 第37页 |
| ·重组 TGase 的生产 | 第37页 |
| ·分析方法 | 第37页 |
| ·结果与讨论 | 第37-40页 |
| ·Pro 与 TGase 在单启动子下共表达 | 第37-38页 |
| ·Pro 与 TGase 在双启动子下共表达 | 第38-39页 |
| ·Pro 与 TGase 间插入蛋白酶 Kex2 识别位点的突变体的构建 | 第39页 |
| ·Pro 与 TGase 间插入蛋白酶 Kex2 识别位点的突变体的表达 | 第39-40页 |
| ·本章小结 | 第40-42页 |
| 第四章 重组 pro-TGase 的分离纯化和酶学性质研究 | 第42-48页 |
| ·前言 | 第42页 |
| ·材料与方法 | 第42-44页 |
| ·菌株 | 第42页 |
| ·培养基 | 第42页 |
| ·试剂和仪器 | 第42页 |
| ·重组 pro-TGase 的生产 | 第42页 |
| ·胞外重组 pro-TGase 的分离纯化 | 第42-43页 |
| ·分析方法 | 第43-44页 |
| ·结果与讨论 | 第44-47页 |
| ·重组 pro-TGase 与突变体的纯化 | 第44页 |
| ·活化的 pro-TGase 最适反应温度和热稳定性的测定 | 第44-45页 |
| ·活化的 pro-TGase 最适 pH 和 pH 稳定性测定 | 第45-46页 |
| ·Pro-TGase 动力学参数分析 | 第46页 |
| ·Pro-TGase 与突变体的二级结构分析 | 第46页 |
| ·Pro-TGase 与突变体的三级结构分析 | 第46-47页 |
| ·本章小结 | 第47-48页 |
| 主要结论与展望 | 第48-50页 |
| 致谢 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-56页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第56页 |
