| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-18页 |
| ·引言 | 第9-10页 |
| ·苏氨酸脱氨酶的研究进展 | 第10-14页 |
| ·苏氨酸脱氨酶的性质 | 第10-12页 |
| ·苏氨酸脱氨酶的结构及调控机理 | 第12-14页 |
| ·苏氨酸脱氨酶的应用 | 第14-16页 |
| ·苏氨酸的代谢途径及其拓展 | 第14-15页 |
| ·苏氨酸脱氨酶的改造及应用 | 第15-16页 |
| ·ACT-domain 及其效应物结合位点分布规律 | 第16-17页 |
| ·本文的研究内容 | 第17-18页 |
| 第二章 材料与方法 | 第18-23页 |
| ·实验试剂 | 第18页 |
| ·BL21 电转化感受态细胞的制备 | 第18-19页 |
| ·蛋白表达与纯化 | 第19页 |
| ·酶活检测 | 第19-21页 |
| ·标准曲线制作 | 第19-20页 |
| ·酶反应的条件 | 第20页 |
| ·反应速率测定 | 第20-21页 |
| ·氨基酸 HPLC 检测方法 | 第21-23页 |
| ·仪器设备 | 第21页 |
| ·氨基酸衍生方法 | 第21页 |
| ·分析方法 | 第21-23页 |
| 第三章 效应物结合位点的理论预测 | 第23-31页 |
| ·蛋白质结构比对 | 第23-24页 |
| ·氨基酸保守性分析 | 第24-27页 |
| ·序列收集与比对 | 第24-25页 |
| ·保守性评估 | 第25-27页 |
| ·突变位点的选择 | 第27-30页 |
| ·小结 | 第30-31页 |
| 第四章 TD 效应物结合位点的实验研究 | 第31-52页 |
| ·ilvA 基因的克隆及 TD 蛋白的表达 | 第31-37页 |
| ·表达载体的构建 | 第31-33页 |
| ·TD 蛋白的表达与纯化 | 第33-35页 |
| ·TD 突变体的构建 | 第35-37页 |
| ·Ile 对野生型 TD 及其突变体的抑制作用 | 第37-42页 |
| ·粗酶液研究 | 第37-38页 |
| ·纯酶研究结果 | 第38-41页 |
| ·小结与讨论 | 第41-42页 |
| ·Val 对野生型 TD 及其突变体酶活的影响 | 第42-43页 |
| ·野生型 TD 及其突变体的动力学性质 | 第43-47页 |
| ·讨论 | 第47-52页 |
| 第五章 双位点突变体 TD 的构建及体内效果验证 | 第52-62页 |
| ·双位点突变体 TD 的构建与性质 | 第52-56页 |
| ·抑制剂 Ile 对双位点突变体 TD 酶活的影响 | 第52-54页 |
| ·双点突变体 TD 的酶动力学性质 | 第54-56页 |
| ·非 Ile 敏感型突变体对 Ile 生产的影响 | 第56-60页 |
| ·载体及菌株构建 | 第56-57页 |
| ·体内效果分析 | 第57-60页 |
| ·小结与讨论 | 第60-62页 |
| 第六章 构建受 Ile 调控的非天然蛋白质 | 第62-75页 |
| ·酶活测定条件选择 | 第62-65页 |
| ·方案设计、分子克隆流程及实验结果 | 第65-71页 |
| ·tdcB 的克隆与表达载体 pET-tdcB 的构建 | 第66-68页 |
| ·TdcBR 的克隆及表达载体 pET-tdcBR 的构建 | 第68-71页 |
| ·酶学性质研究 | 第71-73页 |
| ·小结与讨论 | 第73-75页 |
| 第七章 结论与展望 | 第75-78页 |
| ·结论 | 第75-76页 |
| ·展望 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-84页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第84-85页 |
| 致谢 | 第85页 |
