| 前言 | 第1-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-17页 |
| ·Z.mobilis介绍 | 第10页 |
| ·Z.mobilis的内源质粒研究 | 第10-12页 |
| ·外源基因导入Z.mobilis的载体系统的构建与研究 | 第12-16页 |
| ·课题的研究目的、内容 | 第16-17页 |
| ·研究目的 | 第16页 |
| ·研究内容 | 第16-17页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第17-31页 |
| ·实验材料和仪器 | 第17-21页 |
| ·菌株与质粒 | 第17页 |
| ·酶与试剂 | 第17-18页 |
| ·主要仪器设备 | 第18页 |
| ·培养基和常用试剂的配制方法 | 第18-21页 |
| ·实验方法与步骤 | 第21-29页 |
| ·Z.mobilis的培养及生长曲线的测定 | 第21-22页 |
| ·菌种的活化和保存 | 第21页 |
| ·液体培养 | 第21-22页 |
| ·质粒的提取 | 第22-25页 |
| ·SDS-碱裂解法和Nester法小量提取 | 第22-23页 |
| ·SDS-碱裂解法和Nester法大量提取 | 第23-25页 |
| ·酶切反应 | 第25页 |
| ·电泳分析与分离 | 第25页 |
| ·电泳条带的回收 | 第25-26页 |
| ·穿梭质粒的构建 | 第26-29页 |
| ·pBR328/SphI酶切片段的脱磷反应 | 第26页 |
| ·连接反应 | 第26页 |
| ·E.coli一步法感受态细胞制备与转化、阳性转化子筛选 | 第26-27页 |
| ·重组质粒在E.coli DH5α内的稳定性检测 | 第27页 |
| ·重组质粒在E.coli DH5α内的拷贝数测定 | 第27-28页 |
| ·重组质粒电穿孔转化Z.mobilis CP4和转化子的筛选 | 第28-29页 |
| ·重组质粒在Z.mobilis CP4内的稳定性检测 | 第29页 |
| ·穿梭质粒构建示意图 | 第29-30页 |
| ·实验流程图 | 第30-31页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第31-50页 |
| ·Z.mobilis ATCC10988、CP4生长曲线的测定及菌体的培养 | 第31-35页 |
| ·Z.mobilis ATCC10988、CP4的培养特征与形态观察 | 第31页 |
| ·ATCC10988在两种培养基中的生长曲线测定及生长比较 | 第31-33页 |
| ·CP4的生长曲线测定和抗性测定 | 第33-35页 |
| ·CP4的生长曲线测定 | 第33页 |
| ·CP4的抗性测定 | 第33-35页 |
| ·pZM2质粒的提取、分离制备与内切酶酶切分析鉴定 | 第35-42页 |
| ·小量提取的初步内切酶酶切鉴定 | 第35-36页 |
| ·目的质粒的分离制备与限制内切酶酶切检查 | 第36-40页 |
| ·目的质粒条带的直接回收与限制内切酶酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·2 混合质粒用限制内切酶酶切后2.7kb线状片段的回收与酶切鉴定 | 第37-40页 |
| ·Z.mobilis ATCC10988 2.7kb质粒的酶切分析 | 第40-42页 |
| ·穿梭质粒的构建 | 第42-50页 |
| ·连接与转化 | 第42-43页 |
| ·用于连接的pBR328/SphI片段的制备 | 第42页 |
| ·质粒pZM2/SphI片段的制备 | 第42页 |
| ·重组质粒的连接与检验 | 第42-43页 |
| ·重组转化子的检出与分析鉴定 | 第43-47页 |
| ·重组转化子的检出和质粒电泳分析鉴定 | 第43-45页 |
| ·重组质粒的限制性内切酶分析 | 第45-47页 |
| ·重组质粒在DH5α中的稳定性检测 | 第47页 |
| ·重组质粒在DH5α中的拷贝数测定 | 第47页 |
| ·电穿孔法转化CP4与重组转化子的筛选 | 第47-50页 |
| ·电穿孔法转化CP4与重组转化子的筛选 | 第47-48页 |
| ·CP4重组转化子质粒提取物的酶切鉴定 | 第48-49页 |
| ·重组质粒pZB1在CP4内的稳定性检测 | 第49-50页 |
| 第四章 结论 | 第50-51页 |
| ·结论 | 第50页 |
| ·建议 | 第50-51页 |
| 参考文献 | 第51-55页 |
| 发表论文和科研情况说明 | 第55-56页 |
| 附录 | 第56-59页 |
| 一、 pZM2物理图谱 | 第56-57页 |
| 二、 pBR328物理图谱 | 第57-58页 |
| 三、 重组质粒pZB1物理图谱 | 第58-59页 |
| 致 谢 | 第59页 |
