| 摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-12页 |
| 第1章 绪论 | 第13-21页 |
| 1.1 概述 | 第13-16页 |
| 1.1.1 氨基葡萄糖 | 第13-14页 |
| 1.1.2 氨基葡萄糖国内外生产现状 | 第14-15页 |
| 1.1.3 氨基葡萄糖的生产方式 | 第15-16页 |
| 1.1.4 氨基葡萄糖检测方法 | 第16页 |
| 1.2 氨基葡萄糖在大肠杆菌中的合成代谢机理 | 第16-18页 |
| 1.3 研究背景及内容 | 第18-21页 |
| 1.3.1 研究背景 | 第18-19页 |
| 1.3.2 研究内容 | 第19-21页 |
| 第2章 glmS和gnaI在大肠杆菌中的表达 | 第21-49页 |
| 2.1 引言 | 第21-22页 |
| 2.2 实验材料 | 第22-25页 |
| 2.2.1 菌株与质粒 | 第22-23页 |
| 2.2.2 试剂 | 第23-24页 |
| 2.2.3 培养基 | 第24页 |
| 2.2.4 仪器 | 第24-25页 |
| 2.3 实验方法 | 第25-36页 |
| 2.3.1 枯草芽孢杆菌及酿酒酵母基因组和pET28a质粒的提取 | 第25-26页 |
| 2.3.2 获取glmS | 第26-28页 |
| 2.3.3 获取gnaI | 第28-29页 |
| 2.3.4 pZero-Blunt-glmS、pTOPO-TA-gnaI的连接与转化 | 第29-30页 |
| 2.3.5 筛选阳性转化子 | 第30-31页 |
| 2.3.6 表达质粒pET28a-glmS的制备 | 第31-32页 |
| 2.3.7 表达质粒pET28a-glmS-gnaI的制备 | 第32-34页 |
| 2.3.8 E.coli BL21-pET28a-glmS-gnaI的构建 | 第34页 |
| 2.3.9 E.coli BL21-pET28a-glmS-gnaI的诱导表达 | 第34页 |
| 2.3.10 质粒稳定性检测 | 第34-35页 |
| 2.3.11 发酵培养基优化 | 第35页 |
| 2.3.12 氨基葡萄糖与乙酰氨基葡萄糖的测定 | 第35页 |
| 2.3.13 E.coli BL21-pET28a-glmS-gnaI摇瓶发酵 | 第35-36页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第36-47页 |
| 2.4.1 获取枯草芽孢杆菌与酿酒酵母的基因组 | 第36-37页 |
| 2.4.2 大肠杆菌pET28a质粒提取 | 第37页 |
| 2.4.3 获取glmS和gnaI基因 | 第37-38页 |
| 2.4.4 E.coli DH5α-pZero-Blunt-glmS和E.coli DH5α-pTOPO-TA-gnaI构建结果 | 第38页 |
| 2.4.5 构建表达质粒pET28a-glmS | 第38-39页 |
| 2.4.6 E.coli DH5α-pET28a-glmS阳性重组子的筛选 | 第39页 |
| 2.4.7 构建表达质粒pET28a-glmS-gnaI | 第39-40页 |
| 2.4.8 E.coli DH5α-pET28a-glmS-gnaI阳性重组子的筛选 | 第40-41页 |
| 2.4.9 构建E.coli BL21-pET28a-glmS-gnaI工程菌 | 第41页 |
| 2.4.10 诱导表达结果 | 第41-42页 |
| 2.4.11 重组质粒稳定性的检测结果 | 第42页 |
| 2.4.12 绘制检测萄氨基葡糖和乙酰氨基葡糖的标准曲线 | 第42-43页 |
| 2.4.13 发酵培养基优化结果 | 第43-45页 |
| 2.4.14 E.coli BL21-pET28a-glmS-gnaI摇瓶发酵结果 | 第45-47页 |
| 2.5 总结 | 第47-49页 |
| 第3章 E.coli BL21中glmU、murQ、nanE的敲除 | 第49-71页 |
| 3.1 引言 | 第49-50页 |
| 3.2 实验材料 | 第50-54页 |
| 3.2.1 菌株与质粒 | 第50-52页 |
| 3.2.2 试剂 | 第52-53页 |
| 3.2.3 培养基 | 第53页 |
| 3.2.4 实验仪器 | 第53-54页 |
| 3.3 实验方法 | 第54-65页 |
| 3.3.1 E.coli BL21基因组及pHT01质粒的提取 | 第54页 |
| 3.3.2 三种敲除载体的构建 | 第54-61页 |
| 3.3.3 制备Escherichiacoli电转化感受态细胞 | 第61页 |
| 3.3.4 E.coli BL21ΔglmU、E.coli BL21ΔmurQ、E.coli BL21ΔnanE的构建 | 第61-62页 |
| 3.3.5 glmU、murQ、nanE基因缺陷菌摇瓶发酵 | 第62-63页 |
| 3.3.6 制备三种化学感受态细胞 | 第63页 |
| 3.3.7 构建E.coli BL21ΔglmU-pET28a-glmS-gnaI | 第63-65页 |
| 3.3.8 构建E.coli BL21ΔmurQ-pET28a-glmS-gnaI | 第65页 |
| 3.3.9 构建E.coli BL21ΔnanE-pET28a-glmS-gnaI | 第65页 |
| 3.3.10 质粒稳定性的检测 | 第65页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第65-69页 |
| 3.4.1 基因敲除载体构建结果 | 第65-66页 |
| 3.4.2 glmU、murQ、nanE基因缺陷菌构建结果 | 第66-67页 |
| 3.4.3 摇瓶发酵 | 第67-68页 |
| 3.4.4 E.coli BL21ΔglmU'、E.coli BL21ΔmurQ'、E.coli BL21ΔnanE'的构建 | 第68-69页 |
| 3.4.5 重组质粒稳定性的检测结果 | 第69页 |
| 3.5 总结 | 第69-71页 |
| 第4章 重组菌发酵对氨基葡萄糖积累的影响 | 第71-81页 |
| 4.1 引言 | 第71页 |
| 4.2 实验材料 | 第71-73页 |
| 4.2.1 菌株 | 第71-72页 |
| 4.2.2 试剂 | 第72页 |
| 4.2.3 培养基 | 第72-73页 |
| 4.2.4 实验仪器 | 第73页 |
| 4.3 实验方法 | 第73-74页 |
| 4.3.1 菌种活化 | 第73页 |
| 4.3.2 种子液的培养 | 第73页 |
| 4.3.3 重组菌摇瓶发酵 | 第73-74页 |
| 4.3.4 重组菌发酵液中葡萄糖含量的检测以及OD600值的测定 | 第74页 |
| 4.3.5 三联罐发酵培养 | 第74页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第74-79页 |
| 4.4.1 摇瓶发酵结果 | 第74-76页 |
| 4.4.2 发酵罐发酵培养 | 第76-79页 |
| 4.5 总结 | 第79-81页 |
| 第5章 结论与展望 | 第81-85页 |
| 5.1 结论 | 第81-82页 |
| 5.2 展望 | 第82-85页 |
| 参考文献 | 第85-91页 |
| 致谢 | 第91-93页 |
| 在学期间主要科研成果 | 第93页 |
