| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 引言 | 第12-19页 |
| 第一部分 遗传性凝血因子Ⅻ缺陷症基因突变的研究 | 第19-35页 |
| 1.1 材料与方法 | 第19-22页 |
| 1.1.1 遗传性FⅫ缺陷症患者及家系成员凝血象检测 | 第19-20页 |
| 1.1.2 酶联免疫法检测FⅫ抗原（FⅫ:Ag） | 第20-21页 |
| 1.1.3 遗传性FⅫ缺陷症家系F12基因突变分析 | 第21-22页 |
| 1.2 结果 | 第22-29页 |
| 1.2.1 家系1基因分析结果 | 第22-24页 |
| 1.2.2 家系2基因分析结果 | 第24-25页 |
| 1.2.3 家系3基因分析结果 | 第25-26页 |
| 1.2.4 家系4基因分析结果 | 第26-28页 |
| 1.2.5 家系5基因分析结果 | 第28-29页 |
| 1.3 讨论 | 第29-35页 |
| 第二部分 3种F12基因突变引起FⅫ缺陷症的分子机制研究 | 第35-55页 |
| 2.1 材料和方法 | 第35-42页 |
| 2.1.1 突变表达质粒的构建 | 第35-38页 |
| 2.1.2 细胞培养 | 第38页 |
| 2.1.3 细胞转染 | 第38-39页 |
| 2.1.4 转染细胞内外FⅫ抗原、活性的检测 | 第39-40页 |
| 2.1.5 转染细胞培养上清液和细胞裂解液FⅫ蛋白的Western Blot检测 | 第40页 |
| 2.1.6 Real-time定量PCR | 第40-41页 |
| 2.1.7 蛋白降解抑制试验 | 第41页 |
| 2.1.8 突变载体与正常基因表达载体共转染实验 | 第41页 |
| 2.1.9 p IRES2-FⅫ-HIS/p IRES2-FⅫ-HA免疫共沉淀实验 | 第41-42页 |
| 2.2 结果 | 第42-50页 |
| 2.2.1 重组质粒的鉴定 | 第42-44页 |
| 2.2.2 转染细胞内、外FⅫ抗原的测定 | 第44-46页 |
| 2.2.3 转染细胞培养上清液FⅫ蛋白的Western Blot检测结果 | 第46页 |
| 2.2.4 Real-time定量PCR | 第46-47页 |
| 2.2.5 蛋白降解抑制试验 | 第47-48页 |
| 2.2.6 突变载体与正常基因表达载体共转染实验 | 第48页 |
| 2.2.7 p IRES2-FⅫ-HIS/p IRES2-FⅫ-HA免疫共沉淀实验 | 第48-50页 |
| 2.3 讨论 | 第50-55页 |
| 第三部分 血小板膜蛋白GPIbβ 胞内段调控GPIbα 酶切的分子机制研究 | 第55-71页 |
| 3.1 引言 | 第55-59页 |
| 3.2 材料与方法 | 第59-63页 |
| 3.2.1 载体构建 | 第59-61页 |
| 3.2.2 GST-GPIbβcp、GST-GPIbβcp和HIS-GST融合蛋白的表达 | 第61页 |
| 3.2.3 GST-GPIbβcp、GST-GPIbβcp和HIS-GST融合蛋白的纯化 | 第61-63页 |
| 3.2.4 HIS Pull-down实验 | 第63页 |
| 3.2.5 质谱 | 第63页 |
| 3.3 结果 | 第63-67页 |
| 3.3.1 重组表达质粒的鉴定 | 第63-64页 |
| 3.3.2 蛋白表达与纯化 | 第64-65页 |
| 3.3.3 HIS Pull-down结合质谱法对与GPIbβ 胞内段可能相互作用的蛋白进行筛选 | 第65-67页 |
| 3.4 讨论 | 第67-71页 |
| 第四部分 免疫性血小板减少性紫癜基因诊断研究 | 第71-86页 |
| 4.1 引言 | 第71-74页 |
| 4.2 材料与方法 | 第74-78页 |
| 4.2.1 研究对象 | 第74-75页 |
| 4.2.2 骨髓基因组DNA标本提取 | 第75页 |
| 4.2.3 Agilent Sureselect方法制备测序文库 | 第75-76页 |
| 4.2.4 Illumina Hiseq2000测序 | 第76页 |
| 4.2.5 测序数据分析 | 第76页 |
| 4.2.6 测序数据结果解释 | 第76-77页 |
| 4.2.7 Sanger测序验证 | 第77-78页 |
| 4.3 结果 | 第78-82页 |
| 4.3.1 难治性ITP患者全外显子组测序及数据质量评估 | 第78-79页 |
| 4.3.2 难治性ITP患者全外显子组检测候选致病基因 | 第79-80页 |
| 4.3.3 难治性ITP患者新致病基因CTBP2的鉴定 | 第80页 |
| 4.3.4 CTBP2基因突变p.S240F蛋白预测功能分析 | 第80-82页 |
| 4.4 讨论 | 第82-86页 |
| 结论 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-100页 |
| 综述 | 第100-109页 |
| 参考文献 | 第105-109页 |
| 致谢 | 第109-110页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及研究成果 | 第110页 |
