| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-14页 |
| 符号说明及缩略词 | 第14-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-35页 |
| ·葡萄糖苷酶的酶学特性及催化机制 | 第15-16页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的酶学特性 | 第15页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的催化机制 | 第15-16页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的来源 | 第16-17页 |
| ·β-葡萄糖苷酶生产工艺 | 第17-21页 |
| ·液态发酵 | 第18页 |
| ·其它发酵工艺 | 第18-19页 |
| ·固态发酵 | 第18-19页 |
| ·半固态发酵 | 第19页 |
| ·固定化发酵 | 第19页 |
| ·发酵法生产β-葡萄糖苷酶的影响因素 | 第19-21页 |
| ·培养基的影响 | 第20页 |
| ·发酵条件的影响 | 第20-21页 |
| ·诱导物/阻遏物的影响 | 第21页 |
| ·表面活性剂的影响 | 第21页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的固定化方法 | 第21-23页 |
| ·菌种改造 | 第23-27页 |
| ·诱变育种 | 第23-25页 |
| ·常规诱变 | 第23-24页 |
| ·等离子体诱变 | 第24-25页 |
| ·构建基因工程菌 | 第25-27页 |
| ·β-葡萄糖苷酶基因 | 第25页 |
| ·微生物β-葡萄糖苷酶的表达 | 第25-26页 |
| ·状真菌的基因启动子结构特点 | 第26-27页 |
| ·状真菌遗传转化系统 | 第27页 |
| ·提高目的蛋白表达量的策略 | 第27-28页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的应用 | 第28-33页 |
| ·在食品工业中的应用 | 第29页 |
| ·在纤维素降解中的应用 | 第29页 |
| ·其它应用 | 第29-30页 |
| ·β-葡萄糖苷酶在转化虎杖中白藜芦醇苷生成白藜芦醇的应用 | 第30-32页 |
| ·虎杖简介 | 第30页 |
| ·藜芦醇及其用途 | 第30-31页 |
| ·生物转化法获取白藜芦醇的研究进展 | 第31-32页 |
| ·白藜芦醇的提取方法 | 第32-33页 |
| ·本论文的研究目的、主要内容及意义 | 第33-35页 |
| 第二章 斜卧青霉Peni-1摇瓶液态培养产酶条件优化 | 第35-49页 |
| 引言 | 第35页 |
| ·材料和方法 | 第35-38页 |
| ·菌株、培养基及培养条件 | 第35-36页 |
| ·常用试剂与设备 | 第36页 |
| ·菌株的复壮 | 第36-37页 |
| ·酶活力测定与蛋白质分析 | 第37页 |
| ·产酶条件优化 | 第37-38页 |
| ·绘制发酵产酶曲线 | 第37页 |
| ·单因素优化 | 第37页 |
| ·验证 | 第37-38页 |
| ·结果与分析 | 第38-48页 |
| ·菌株的复壮 | 第38页 |
| ·产酶曲线 | 第38-40页 |
| ·产酶条件的优化 | 第40-48页 |
| ·装液量对产酶的影响 | 第40页 |
| ·不同碳源对产酶的影响 | 第40-41页 |
| ·不同氮源对产酶的影响 | 第41-42页 |
| ·麸皮对产酶的影响 | 第42-43页 |
| ·不同pH对产酶的影响 | 第43-44页 |
| ·补料对产酶的影响 | 第44-46页 |
| ·Tween-80对产酶的影响 | 第46-47页 |
| ·槐糖脂对产酶的影响 | 第47-48页 |
| ·工艺验证 | 第48页 |
| ·小结 | 第48-49页 |
| 第三章 搅拌式发酵罐生产工艺研究 | 第49-63页 |
| 引言 | 第49页 |
| ·材料和方法 | 第49-51页 |
| ·菌株、培养基及培养条件 | 第49页 |
| ·常用试剂与设备 | 第49页 |
| ·相关参数的测定 | 第49-50页 |
| ·种子培养条件 | 第50页 |
| ·7.5L发酵罐发酵工艺研究 | 第50-51页 |
| ·结果与讨论 | 第51-62页 |
| ·种子培养条件的影响 | 第51-52页 |
| ·7.5L发酵罐液体深层发酵工艺的优化 | 第52-62页 |
| ·固定转速和通气量时发酵罐产酶过程 | 第52-54页 |
| ·通过调整搅拌转速和通气量控制DO的发酵过程 | 第54-55页 |
| ·pH调控 | 第55-56页 |
| ·中期补氮的影响 | 第56-57页 |
| ·高底物浓度 | 第57-58页 |
| ·变温 | 第58-59页 |
| ·泡沫控制和瞬时刷料 | 第59-60页 |
| ·工艺验证 | 第60-62页 |
| ·小结 | 第62-63页 |
| 第四章 斜卧青霉菌株的诱变、筛选及突变株产酶的研究 | 第63-72页 |
| 引言 | 第63页 |
| ·材料和方法 | 第63-66页 |
| ·菌株、培养基及培养条件 | 第63-64页 |
| ·常用缓冲液、主要试剂及仪器 | 第64页 |
| ·酶活力测定 | 第64-65页 |
| ·DES诱变 | 第65页 |
| ·DES-UV复合诱变 | 第65页 |
| ·等离子体复合诱变 | 第65-66页 |
| ·平板初筛 | 第66页 |
| ·摇瓶复筛 | 第66页 |
| ·高产菌株的传代稳定性实验 | 第66页 |
| ·结果与讨论 | 第66-71页 |
| ·筛选平板的优化 | 第66-67页 |
| ·诱变剂量与致死率 | 第67-70页 |
| ·DES诱变致死率曲线的制作 | 第67-68页 |
| ·UV致死率曲线 | 第68-69页 |
| ·等离子体诱变致死率曲线 | 第69-70页 |
| ·菌株诱变结果 | 第70页 |
| ·诱变株的遗传稳定性 | 第70-71页 |
| ·小结 | 第71-72页 |
| 第五章 利用基因工程技术在Peni-1中进行β-葡萄糖苷酶过表达 | 第72-84页 |
| 引言 | 第72-73页 |
| ·材料和方法 | 第73-78页 |
| ·菌株和质粒 | 第73页 |
| ·培养基 | 第73页 |
| ·常用缓冲液、试剂与仪器 | 第73-74页 |
| ·过表达盒的构建 | 第74-76页 |
| ·基因组DNA的提取和定量 | 第74页 |
| ·引物设计和目的基因的克隆 | 第74-75页 |
| ·过表达盒的构建 | 第75-76页 |
| ·融合片段的酶切验证 | 第76页 |
| ·原生质体的制备和转化 | 第76-77页 |
| ·菌丝的培养 | 第76页 |
| ·原生质体制备 | 第76-77页 |
| ·原生质体转化 | 第77页 |
| ·斜卧青霉转化子染色体基因组的小量提取 | 第77-78页 |
| ·转化子筛选 | 第78页 |
| ·蛋白浓度及酶活测定 | 第78页 |
| ·结果与讨论 | 第78-83页 |
| ·基因组DNA的质量 | 第78-79页 |
| ·目的基因的克隆 | 第79-80页 |
| ·过表达盒的构建 | 第80-81页 |
| ·过表达盒的酶切验证 | 第81-82页 |
| ·转化子的筛选 | 第82-83页 |
| ·转化子的酶活测定 | 第83页 |
| ·小结 | 第83-84页 |
| 第六章 虎杖苷的转化和白藜芦醇的生产 | 第84-110页 |
| 引言 | 第84页 |
| ·材料与方法 | 第84-88页 |
| ·材料与仪器 | 第84-85页 |
| ·材料和试剂 | 第84-85页 |
| ·主要仪器 | 第85页 |
| ·实验方法 | 第85-88页 |
| ·粗酶液的提取 | 第85页 |
| ·β-葡萄糖苷酶酶活的测定 | 第85页 |
| ·白藜芦醇的检测分析方法 | 第85-86页 |
| ·转化率的计算 | 第86-87页 |
| ·虎杖中虎杖苷和白藜卢醇的含量测定(热回流法) | 第87页 |
| ·虎杖苷标准品的酶解 | 第87页 |
| ·虎杖中虎杖苷的初始酶解条件 | 第87页 |
| ·虎杖酶法转化提取白藜芦醇酶解条件的优化 | 第87页 |
| ·虎杖酶法转化提取白藜芦醇酶解后提取条件的优化 | 第87-88页 |
| ·交联-包埋法制备固定化酶 | 第88页 |
| ·结果与讨论 | 第88-109页 |
| ·测定方法的建立 | 第88-93页 |
| ·薄层层析(TLC)分析方法的确立 | 第88-89页 |
| ·紫外分光光度计法 | 第89-91页 |
| ·高效液相色谱(HPLC) | 第91-93页 |
| ·虎杖样品中白藜芦醇和虎杖苷的含量测定 | 第93页 |
| ·虎杖苷标品(PD)的酶解 | 第93-94页 |
| ·虎杖酶法提取效果的确证 | 第94-95页 |
| ·产物提取策略的确定 | 第95-96页 |
| ·酶解条件的优化 | 第96-103页 |
| ·原料水浸时间的影响 | 第96页 |
| ·酶用量的初步确定 | 第96-98页 |
| ·酶解时间的初步确定 | 第98页 |
| ·酶解温度 | 第98-99页 |
| ·pH的影响 | 第99-101页 |
| ·酶解固液比 | 第101页 |
| ·转速的影响 | 第101-103页 |
| ·提取条件的优化 | 第103-105页 |
| ·提取乙醇总浓度对白藜芦醇提取效果的影响 | 第103页 |
| ·提取固液比 | 第103-104页 |
| ·提取时间 | 第104页 |
| ·提取次数 | 第104页 |
| ·储存温度对白藜芦醇提取液稳定性的影响 | 第104-105页 |
| ·工艺验证 | 第105-106页 |
| ·固定化酶的制备和对虎杖的酶法提取 | 第106-109页 |
| ·酶/海藻酸钠比例的影响 | 第106-107页 |
| ·戊二醛终浓度的影响 | 第107页 |
| ·氯化钙浓度的影响 | 第107-108页 |
| ·固定化酶对虎杖的酶法提取 | 第108-109页 |
| ·小结 | 第109-110页 |
| 全文总结与展望 | 第110-112页 |
| 1 本论文取得的创新性成果 | 第110页 |
| 2 本论文存在的问题及深入方向 | 第110-112页 |
| 参考文献 | 第112-117页 |
| 致谢 | 第117-119页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第119页 |
