| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-22页 |
| ·海藻糖的理化性质和生物学功能 | 第14-15页 |
| ·海藻糖的理化性质 | 第14页 |
| ·海藻糖的生物学功能 | 第14-15页 |
| ·海藻糖的保护机理 | 第15页 |
| ·海藻糖的工业应用前景 | 第15-16页 |
| ·食品工业 | 第15页 |
| ·医药行业 | 第15-16页 |
| ·农业 | 第16页 |
| ·化妆品行业 | 第16页 |
| ·分子生物学 | 第16页 |
| ·海藻糖的生产与制备 | 第16-17页 |
| ·海藻糖合酶的研究进展 | 第17-20页 |
| ·海藻糖在生物体内的合成酶系 | 第17页 |
| ·海藻糖合酶的存在 | 第17页 |
| ·海藻糖合酶的酶学性质 | 第17-18页 |
| ·催化机理的研究 | 第18-19页 |
| ·基因工程和酶的固定化技术 | 第19页 |
| ·目前存在的主要问题和拟解决方案 | 第19-20页 |
| ·本研究的意义与目的 | 第20-22页 |
| ·本研究的意义 | 第20页 |
| ·本研究的目的 | 第20-22页 |
| 第二章 金黄节杆菌海藻糖合酶基因的克隆 | 第22-34页 |
| ·试验材料 | 第22-23页 |
| ·菌株与质粒 | 第22页 |
| ·引物合成 | 第22页 |
| ·试剂盒、工具酶和生化试剂 | 第22页 |
| ·主要仪器 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22-23页 |
| ·常用溶液 | 第23页 |
| ·试验方法 | 第23-26页 |
| ·金黄节杆菌基因组DNA 提取 | 第23-24页 |
| ·PCR 扩增目的基因片段 | 第24页 |
| ·目的片段回收 | 第24-25页 |
| ·目的片段与pGEM-T 载体连接 | 第25页 |
| ·E.coli TOP10 感受态制备 | 第25页 |
| ·转化大肠杆菌TOP10 | 第25-26页 |
| ·SDS 碱裂解法小量制备质粒DNA | 第26页 |
| ·重组单克隆的PCR 验证 | 第26页 |
| ·试验结果 | 第26-33页 |
| ·海藻糖合酶TreS 的生物信息学分析 | 第26-27页 |
| ·金黄节杆菌ATCC BAA-1386 海藻糖合酶的序列分析结果 | 第27页 |
| ·金黄节杆菌ATCC 13344 海藻糖合酶的测序结果 | 第27-32页 |
| ·金黄节杆菌ATCC 13344 海藻糖合酶的序列分析 | 第32-33页 |
| ·讨论 | 第33页 |
| ·小结 | 第33-34页 |
| 第三章 金黄节杆菌海藻糖合酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第34-49页 |
| ·试验材料 | 第34-36页 |
| ·菌株及载体 | 第34页 |
| ·化学试剂和试剂盒 | 第34页 |
| ·培养基及溶液配制 | 第34-35页 |
| ·试验仪器 | 第35-36页 |
| ·试验方法 | 第36-40页 |
| ·pGEM-T-treS 的酶切与目的片段回收 | 第36页 |
| ·pET-30a 载体的酶切 | 第36页 |
| ·连接反应 | 第36页 |
| ·转化大肠杆菌TOP10 | 第36页 |
| ·重组表达载体的PCR 与双酶切鉴定 | 第36页 |
| ·重组表达菌株的构建 | 第36-37页 |
| ·重组菌的诱导表达 | 第37页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE 分析 | 第37-38页 |
| ·蛋白定量 | 第38页 |
| ·重组酶活力测定 | 第38页 |
| ·诱导温度的优化 | 第38页 |
| ·IPTG 浓度的优化 | 第38-39页 |
| ·诱导前菌体OD 值的优化 | 第39页 |
| ·取样时间的优化 | 第39页 |
| ·重组海藻糖合酶的纯化 | 第39-40页 |
| ·重组酶转化产物的薄层色谱（TLC）分析 | 第40页 |
| ·重组酶转化产物的离子色谱（IC）分析 | 第40页 |
| ·试验结果 | 第40-46页 |
| ·重组表达载体pET-30a-treS 的构建 | 第40-41页 |
| ·重组菌诱导表达产物的SDS-PAGE 分析 | 第41页 |
| ·重组海藻糖合酶的功能验证 | 第41-42页 |
| ·诱导温度对蛋白表达的影响 | 第42-43页 |
| ·诱导前菌体OD 值对蛋白表达的影响 | 第43页 |
| ·IPTG 浓度对蛋白表达的影响 | 第43-44页 |
| ·目的蛋白表达随时间的变化 | 第44-45页 |
| ·重组海藻糖合酶的纯化 | 第45页 |
| ·蛋白定量 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46-48页 |
| ·小结 | 第48-49页 |
| 第四章 重组海藻糖合酶的酶学性质分析 | 第49-57页 |
| ·试验材料 | 第49页 |
| ·主要试剂 | 第49页 |
| ·离子色谱分析用溶液 | 第49页 |
| ·薄层色谱分析用溶液 | 第49页 |
| ·主要仪器 | 第49页 |
| ·试验方法 | 第49-51页 |
| ·重组海藻糖合酶的最适pH 及pH 稳定性分析 | 第49-50页 |
| ·重组海藻糖合酶的最适温度及热稳定性测定 | 第50页 |
| ·金属离子和化学试剂对酶活力的影响 | 第50页 |
| ·产物生成率随催化时间的变化曲线 | 第50-51页 |
| ·重组海藻糖合酶的底物特异性分析 | 第51页 |
| ·葡萄糖对重组海藻糖合酶的影响 | 第51页 |
| ·重组海藻糖合酶AA-TreS 的动力学常数分析 | 第51页 |
| ·试验结果 | 第51-55页 |
| ·重组海藻糖合酶AA-TreS 的最适pH 和pH 稳定曲线 | 第51-52页 |
| ·重组海藻糖合酶的最适反应温度和热稳定曲线 | 第52-53页 |
| ·重组海藻糖合酶转化率随时间变化曲线 | 第53页 |
| ·金属离子和化学试剂对重组海藻糖合酶酶活力的影响 | 第53-54页 |
| ·重组海藻糖合酶的底物特异性 | 第54页 |
| ·葡萄糖对重组海藻糖合酶的抑制作用 | 第54-55页 |
| ·重组海藻糖合酶的动力学常数 | 第55页 |
| ·讨论 | 第55-56页 |
| ·葡萄糖的产生和抑制作用 | 第55页 |
| ·海藻糖合酶的底物专一性 | 第55页 |
| ·海藻糖合酶的最适反应条件和抑制剂 | 第55-56页 |
| ·小结 | 第56-57页 |
| 第五章 全文结论 | 第57-59页 |
| ·主要研究结论 | 第57-58页 |
| ·本研究的创新点 | 第58页 |
| ·下一步的工作设想 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 作者简历 | 第67页 |
