| 摘要 | 第3-4页 |
| ABSTRACT | 第4-5页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-27页 |
| 1.1 肿瘤介绍 | 第9-11页 |
| 1.1.1 肿瘤的产生机制 | 第9-10页 |
| 1.1.2 肿瘤的治疗 | 第10页 |
| 1.1.3 化学治疗药物 | 第10-11页 |
| 1.1.4 化学治疗药物优缺点 | 第11页 |
| 1.2 治疗性抗肿瘤多肽 | 第11-15页 |
| 1.2.1 抗肿瘤多肽的发现 | 第12页 |
| 1.2.2 抗肿瘤多肽的分类 | 第12-13页 |
| 1.2.3 抗肿瘤多肽的作用机理 | 第13-14页 |
| 1.2.4 抗肿瘤多肽的应用前景 | 第14-15页 |
| 1.3 人颗粒体蛋白（hGRN） | 第15-20页 |
| 1.3.1 PGRN简介 | 第15页 |
| 1.3.2 PGRN在机体细胞中的功能 | 第15-17页 |
| 1.3.3 PGRN的信号传导 | 第17-18页 |
| 1.3.4 GRN简介 | 第18页 |
| 1.3.5 GRN研究进展 | 第18-19页 |
| 1.3.6 hGRN简介 | 第19-20页 |
| 1.4 发酵工艺 | 第20-23页 |
| 1.4.1 发酵类型简述 | 第21页 |
| 1.4.2 发酵的主要影响因素 | 第21-23页 |
| 1.5 响应面理论 | 第23-24页 |
| 1.5.1 响应面优化法的原理和特点 | 第24页 |
| 1.6 课题研究的内容以及创新点 | 第24-27页 |
| 第二章 表达载体的构建 | 第27-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-28页 |
| 2.1.1 实验菌株以及引物 | 第27页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第27-28页 |
| 2.1.3 实验设备 | 第28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-31页 |
| 2.2.1 实验相关溶液配制 | 第28-29页 |
| 2.2.2 人颗粒体蛋白A的基因克隆 | 第29-30页 |
| 2.2.2.1 聚合酶链式反应 | 第29页 |
| 2.2.2.2 含有目的DNA的产物提取 | 第29-30页 |
| 2.2.3 获取目的DNA片段 | 第30页 |
| 2.2.4 pGAPZαA提取以及载体构建 | 第30-31页 |
| 2.2.5 质粒载体转入大肠杆菌 | 第31页 |
| 2.3 实验结果 | 第31-33页 |
| 2.3.1 人颗粒体蛋白A基因的克隆 | 第31-32页 |
| 2.3.2 pGAPZαA提取以及载体构建结果 | 第32页 |
| 2.3.3 测序结果 | 第32-33页 |
| 2.4 实验结果讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 人颗粒体蛋白A的电转入酵母细胞 | 第35-51页 |
| 3.1 实验材料 | 第35-37页 |
| 3.1.1 实验菌株 | 第35页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第35-36页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第36-37页 |
| 3.2 实验方法 | 第37-46页 |
| 3.2.1 实验相关溶液配制 | 第37-38页 |
| 3.2.2 培养基配制 | 第38-39页 |
| 3.2.3 人颗粒体蛋白A基因转入酵母细胞 | 第39-41页 |
| 3.2.3.1 质粒的提取 | 第39-40页 |
| 3.2.3.2 感受态酵母细胞的制备 | 第40页 |
| 3.2.3.3 平板涂布 | 第40-41页 |
| 3.2.4 聚合酶链式反应操作 | 第41-42页 |
| 3.2.4.1 获取SMD1168H基因组 | 第41-42页 |
| 3.2.4.2 聚合酶链式反应 | 第42页 |
| 3.2.5 重组酵母细胞的表达以及验证 | 第42-44页 |
| 3.2.6 人颗粒体蛋白A重组基因的表达 | 第44页 |
| 3.2.7 人颗粒体蛋白A的分离提纯 | 第44-45页 |
| 3.2.8 人颗粒体蛋白A的透析 | 第45页 |
| 3.2.9 人颗粒体蛋白A浓度测定 | 第45-46页 |
| 3.3 实验结果 | 第46-48页 |
| 3.3.1 人颗粒体蛋白A基因转入酵母结果 | 第46-47页 |
| 3.3.2 聚合酶链式反应操作结果 | 第47页 |
| 3.3.3 重组酵母细胞的表达以及验证 | 第47-48页 |
| 3.4 人颗粒体蛋白A的分离提纯 | 第48-49页 |
| 3.5 讨论 | 第49-51页 |
| 第四章 转入人颗粒体蛋白A的酵母菌SMD1168H响应面发酵优化 | 第51-57页 |
| 4.1 实验材料 | 第51-52页 |
| 4.1.1 实验菌株 | 第51页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第51页 |
| 4.1.3 实验仪器 | 第51-52页 |
| 4.2 实验方法及实验设计 | 第52-54页 |
| 4.3 实验结果及讨论 | 第54-57页 |
| 第五章 人颗粒体蛋白A的生物活性研究 | 第57-67页 |
| 5.1 实验材料 | 第57-58页 |
| 5.1.1 实验用细胞株 | 第57页 |
| 5.1.2 实验试剂 | 第57-58页 |
| 5.1.3 实验仪器 | 第58页 |
| 5.2 实验方法 | 第58-62页 |
| 5.2.1 溶液配置 | 第58页 |
| 5.2.2 克隆人颗粒体蛋白A | 第58页 |
| 5.2.3 实验用细胞株的预处理及应用 | 第58-59页 |
| 5.2.3.1 细胞预处理 | 第58-59页 |
| 5.2.3.2 细胞株的应用 | 第59页 |
| 5.2.4 MTT法检测克隆人颗粒体蛋白A的抗肿瘤活性 | 第59-60页 |
| 5.2.5 克隆人颗粒体蛋白A对肿瘤细胞形态的影响 | 第60页 |
| 5.2.6 4,6-联脒2苯基吲哚染色检测 | 第60-61页 |
| 5.2.7 Annexin V-FITC/碘化丙啶双染色法 | 第61-62页 |
| 5.3 实验结果 | 第62-65页 |
| 5.3.1 MTT法检测克隆人颗粒体蛋白A的抗肿瘤活性 | 第62-63页 |
| 5.3.2 克隆人颗粒体蛋白A对肿瘤细胞形态的影响 | 第63-64页 |
| 5.3.3 4,6-联脒2苯基吲哚染色检测 | 第64-65页 |
| 5.3.4 Annexin V-FITC/碘化丙啶双染色法 | 第65页 |
| 5.4 讨论 | 第65-67页 |
| 全文结论 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文 | 第75-76页 |
