| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6页 |
| 第1章 前言 | 第11-19页 |
| 1.1 番茄红素简介 | 第11页 |
| 1.2 番茄红素的化学合成 | 第11页 |
| 1.3 番茄红素的生物合成 | 第11-18页 |
| 1.3.1 利用酵母合成番茄红素 | 第12页 |
| 1.3.2 利用霉菌合成番茄红素 | 第12页 |
| 1.3.3 利用大肠杆菌合成番茄红素 | 第12-18页 |
| 1.3.3.1 番茄红素合成途径 | 第12-13页 |
| 1.3.3.2 提高大肠杆菌合成番茄红素的各种手段 | 第13-18页 |
| 1.4 本课题研究的意义主要内容 | 第18-19页 |
| 1.4.1 课题意义 | 第18页 |
| 1.4.2 主要内容 | 第18-19页 |
| 第2章 中心代谢基因敲除对大肠杆菌产番茄红素的影响 | 第19-33页 |
| 2.1 引言 | 第19页 |
| 2.2 实验材料 | 第19-22页 |
| 2.2.1 质粒和菌株 | 第19-20页 |
| 2.2.2 培养基和药品 | 第20-21页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第21-22页 |
| 2.3 基因缺陷大肠杆菌菌株的构建与验证 | 第22-24页 |
| 2.4 实验方法 | 第24-29页 |
| 2.4.1 细胞浓度的测定 | 第24页 |
| 2.4.2 番茄红素的测定 | 第24-25页 |
| 2.4.3 比生长速率的测量 | 第25-26页 |
| 2.4.4 菌体干重和OD_(600)的关系 | 第26页 |
| 2.4.5 比生长速率测量 | 第26-27页 |
| 2.4.6 总RNA的提取 | 第27-28页 |
| 2.4.7 反转录 | 第28页 |
| 2.4.8 qRT-PCR反应 | 第28-29页 |
| 2.4.9 qRT-PCR数据分析方法 | 第29页 |
| 2.5 结果和分析 | 第29-32页 |
| 2.5.1 中心代谢基因敲除对重组大肠杆菌的生长的影响 | 第29-30页 |
| 2.5.2 中心代谢基因敲除对重组大肠杆菌的生产的影响 | 第30-31页 |
| 2.5.3 中心代谢基因敲除对重组大肠杆菌的idi,dxs和crtE基因表达量的影响 | 第31-32页 |
| 2.6 本章小结 | 第32-33页 |
| 第3章 异戊二烯途径(DXP)的构建及其效果 | 第33-52页 |
| 3.1 引言 | 第33页 |
| 3.2 实验材料 | 第33-35页 |
| 3.2.1 菌株与质粒 | 第34页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第34-35页 |
| 3.3 实验方法 | 第35-40页 |
| 3.3.1 细菌基因组DNA的提取 | 第35-36页 |
| 3.3.1.1 培养条件 | 第35页 |
| 3.3.1.2 细菌基因组DNA提取步骤 | 第35-36页 |
| 3.3.1.3 各种质粒的提取 | 第36页 |
| 3.3.2 大肠杆菌JM109、BW25113感受态的制备 | 第36页 |
| 3.3.3 PCR引物设计 | 第36-37页 |
| 3.3.4 PCR反应体系 | 第37-38页 |
| 3.3.5 PCR产物处理 | 第38-39页 |
| 3.3.5.1 PCR产物纯化 | 第38页 |
| 3.3.5.2 目的条带的胶回收 | 第38页 |
| 3.3.5.3 DNA的酶切与连接 | 第38-39页 |
| 3.3.6 化学转化法 | 第39页 |
| 3.3.7 重组子的粗筛选与酶切、PCR验证 | 第39-40页 |
| 3.3.7.1 菌体电泳 | 第39-40页 |
| 3.3.7.2 酶切和PCR验证 | 第40页 |
| 3.4 结果与分析 | 第40-48页 |
| 3.4.1 细菌基因组DNA的提取 | 第40-41页 |
| 3.4.1.1 大肠杆菌JM109基因组DNA的提取 | 第40-41页 |
| 3.4.2 异戊二烯途径的构建 | 第41-47页 |
| 3.4.2.1 过表达载体pSE380-idi的构建 | 第41-43页 |
| 3.4.2.2 过表达载体pSE380-idi-dxs的构建 | 第43-45页 |
| 3.4.2.3 过表达载体pSE380-idi-dxs-ispDF的构建 | 第45-47页 |
| 3.4.3 构建的质粒的图谱 | 第47-48页 |
| 3.5 DXP途径基因过表达对重组大肠杆菌的生长和生产的影响 | 第48-51页 |
| 3.5.1 DXP途径基因过表达对重组大肠杆菌的生长的影响 | 第49页 |
| 3.5.2 DXP途径基因过表达对重组大肠杆菌生产的影响 | 第49-50页 |
| 3.5.3 DXP途径基因过表达对重组大肠杆菌中idi、dxs和crtE基因的表达量影响 | 第50-51页 |
| 3.6 本章小结 | 第51-52页 |
| 第4章 结合基因过表达和基因敲除提高番茄红素产量 | 第52-57页 |
| 4.1 引言 | 第52页 |
| 4.2 实验材料 | 第52-53页 |
| 4.2.1 菌株 | 第52页 |
| 4.2.2 药品和培养基 | 第52-53页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第53页 |
| 4.3 结果和分析 | 第53-55页 |
| 4.3.1 基因过表达和基因敲除结合对重组大肠杆菌生长的影响 | 第53-54页 |
| 4.3.2 基因过表达和基因敲除结合对重组大肠杆菌生产的影响 | 第54-55页 |
| 4.3.3 基因过表达和基因敲除结合对番茄红素合成基因idi、dxs和crtE的表达量影响 | 第55页 |
| 4.8 本章小结 | 第55-57页 |
| 第5章 吲哚对番茄红素生物合成过程的影响 | 第57-61页 |
| 5.1 引言 | 第57页 |
| 5.2 实验材料 | 第57页 |
| 5.2.1 菌株与质粒 | 第57页 |
| 5.2.2 实验试剂与仪器 | 第57页 |
| 5.3 实验方法 | 第57页 |
| 5.3.1 基因工程菌的培养 | 第57页 |
| 5.3.2 番茄红素的测量 | 第57页 |
| 5.3.3 基因转录水平 | 第57页 |
| 5.4 实验结果 | 第57-60页 |
| 5.4.1 吲哚对番茄红素生产菌株生长的影响 | 第57-58页 |
| 5.4.2 吲哚对番茄红素产量的影响 | 第58-59页 |
| 5.4.3 外源添加吲哚对重组菌合成番茄红素的关键基因表达量的影响 | 第59-60页 |
| 5.5 本章小结 | 第60-61页 |
| 第6章 结论和展望 | 第61-64页 |
| 6.1 结论 | 第61-62页 |
| 6.2 展望 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 附录 | 第70页 |
