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Ectoine分泌型菌株PHB和Ectoine共合成技术研究

创新点摘要第5-6页
摘要第6-9页
ABSTRACT第9-11页
第1章 绪论第16-54页
    1.1 微生物共合成技术研究现状第17-22页
        1.1.1 微生物共合成的条件第17-18页
        1.1.2 微生物共合成的分类第18-21页
        1.1.3 PHB和Ectoine共合成概述第21-22页
    1.2 Ectoine及其微生物合成第22-34页
        1.2.1 Ectoine的性质及应用第22-24页
        1.2.2 Ectoine合成菌株第24-25页
        1.2.3 Ectoine的微生物代谢途径及相关酶第25-28页
        1.2.4 Ectoine的合成代谢调控第28-30页
        1.2.5 Ectoine微生物发酵工艺第30-31页
        1.2.6 Ectoine合成的影响因素第31-33页
        1.2.7 Ectoine的提取纯化技术第33-34页
    1.3 Ectoine分泌型菌株的发现、鉴定及其特点第34-36页
        1.3.1 Ectoine分泌型菌株的发现、验证及其性质第34-35页
        1.3.2 分泌型菌株在Ectoine合成方面的优势第35-36页
    1.4 PHB及其微生物合成第36-47页
        1.4.1 PHB的性质及应用第36-39页
        1.4.2 PHB的微生物合成菌株第39-40页
        1.4.3 PHB的合成代谢途径及相关酶第40-42页
        1.4.4 PHB的合成代谢调控第42-43页
        1.4.5 PHB合成的主要影响因素第43-45页
        1.4.6 PHB的发酵工艺第45-46页
        1.4.7 PHB的提取方法第46-47页
    1.5 PHB/Ect微生物共合成研究第47-51页
        1.5.1 PHB/Ect微生物共合成菌株第47-48页
        1.5.2 PHB/Ect微生物共合成工艺第48-49页
        1.5.3 PHB/Ect微生物共合成影响因素第49-51页
        1.5.4 PHB/Ect微生物共合成产物的提取现状第51页
    1.6 本文研究的立题背景、研究内容及技术路线第51-54页
        1.6.1 本文的立题背景第51-52页
        1.6.2 本文研究内容第52-53页
        1.6.3 本文研究技术路线第53-54页
第2章 实验材料与方法第54-68页
    2.1 实验材料第54-57页
        2.1.1 菌株第54页
        2.1.2 标准品试剂第54页
        2.1.3 主要试剂第54-55页
        2.1.4 主要试剂盒第55-56页
        2.1.5 仪器设备第56-57页
        2.1.6 培养基第57页
    2.2 实验方法第57-68页
        2.2.1 三角瓶培养方法第57页
        2.2.2 发酵罐发酵方法第57-58页
        2.2.3 细胞干重测定方法第58页
        2.2.4 ~1H-NMR鉴定Ectoine方法第58页
        2.2.5 ~1H-NMR鉴定PHB方法第58-59页
        2.2.6 凝胶渗透色谱测定PHB分子量和分子量分布第59页
        2.2.7 Ectoine浓度测定方法第59页
        2.2.8 PHB浓度测定方法第59-61页
        2.2.9 磷酸盐的测定方法第61页
        2.2.10 蛋白质浓度的测定方法第61页
        2.2.11 谷氨酸单钠浓度测定方法第61页
        2.2.12 糖蜜组分测定方法第61-62页
        2.2.13 NaCl胁迫下Ectoine的吸收效率第62页
        2.2.14 teaA基因克隆、转化及诱导表达第62-64页
        2.2.15 聚丙烯酰胺凝胶电泳方法(SDS-PAGE)第64页
        2.2.16 teaA的mRNA表达丰度测定第64-66页
        2.2.17 TeaA对Ectoine的结合率测定方法第66页
        2.2.18 基于低渗冲击的Ectoine释放第66页
        2.2.19 基于低渗冲击的PHB产物释放第66-67页
        2.2.20 PHB/Ect共合成产物提取回收第67页
        2.2.21 活细胞计数方法第67-68页
第3章 Ectoine分泌型菌株分泌Ectoine机理研究第68-84页
    3.1 结果与讨论第70-82页
        3.1.1 菌株对NaCl胁迫的响应第70-71页
        3.1.2 Ectoine的释放与吸收第71-74页
        3.1.3 Q-RT-PCR检测teaA基因的mRNA表达丰度差异第74-79页
        3.1.4 TeaA对Ectoine结合率测定第79-80页
        3.1.5 推广的Kunte模型第80-82页
    3.2 小结第82-84页
第4章 PHB/Ect共合成Ectoine分泌型菌株选取及其Ectoine合成条件优化第84-97页
    4.1 结果与讨论第86-96页
        4.1.1 H. venusta DSM 4743分泌Ectoine第86-91页
        4.1.2 Ectoine分泌型菌株H venusta DSM 4743合成Ectoine条件优化第91-96页
    4.2 小结第96-97页
第5章 Halomonas venusta DSM 4743合成PHB的鉴定及条件优化第97-107页
    5.1 结果与讨论第98-106页
        5.1.1 H. venusta DSM 4743合成PHB的~1H-NMR鉴定第98-99页
        5.1.2 H. venusta DSM 4743合成PHB条件优化第99-106页
    5.2 小结第106-107页
第6章 Halomonas venusta PHB/Ect共合成条件优化及基于分批发酵动力学模型分析的底物流加发酵第107-125页
    6.1 结果与讨论第108-123页
        6.1.1 H. venusta DSM 4743 PHB/Ect共合成条件优化第108-112页
        6.1.2 H. venusta DSM 4743共合成PHB/Ect发酵罐分批发酵第112-113页
        6.1.3 H. venusta DSM 4743发酵动力学模型的建立第113-121页
        6.1.4 基于动力学模型分析的PHB/Ect共合成底物流加发酵第121-123页
    6.2 小结第123-125页
第7章 PHB/Ect共合成产物循环制备体系构建第125-139页
    7.1 结果与讨论第126-137页
        7.1.1 基于低渗冲击的PHB产物的释放第126-130页
        7.1.2 低渗冲击释放条件的优化第130-132页
        7.1.3 PHB/Ect共合成产物的循环制备体系第132-137页
    7.2 小结第137-139页
结论第139-141页
参考文献第141-154页
攻读学位期间公开发表论文第154-156页
致谢第156-158页
作者简介第158页

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