| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 1 引言 | 第11-28页 |
| ·立题背景及目的 | 第11-12页 |
| ·副溶血弧菌简介 | 第12-13页 |
| ·副溶血弧菌生物学性状 | 第12页 |
| ·副溶血弧菌的流行病学特征 | 第12-13页 |
| ·副溶血弧菌的毒力因子 | 第13页 |
| ·副溶血弧菌检测方法研究现状 | 第13-16页 |
| ·环介导等温扩增(LAMP)技术概述 | 第16-26页 |
| ·LAMP 的特点 | 第16-17页 |
| ·LAMP 方法的引物设计 | 第17-19页 |
| ·LAMP 反应原理 | 第19-23页 |
| ·LAMP 反应产物的检测方法 | 第23-24页 |
| ·LAMP 方法的应用 | 第24-26页 |
| ·研究内容 | 第26-28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-40页 |
| ·试验材料 | 第28-30页 |
| ·试验菌株 | 第28-29页 |
| ·仪器与设备 | 第29页 |
| ·主要培养基 | 第29页 |
| ·样品与生化试剂 | 第29-30页 |
| ·试验方法 | 第30-31页 |
| ·副溶血弧菌培养 | 第30页 |
| ·副溶血弧菌基因组DNA 的提取 | 第30-31页 |
| ·引物设计和操作程序 | 第31页 |
| ·LAMP 引物设计 | 第31页 |
| ·LAMP 和PCR 操作程序 | 第31页 |
| ·PCR 反应条件的优化 | 第31-32页 |
| ·LAMP 反应条件优化 | 第32-34页 |
| ·反应温度的优化 | 第32页 |
| ·适宜Mg~(2+)浓度选择 | 第32页 |
| ·dNTPs 浓度的优化 | 第32页 |
| ·Bst 酶的优化 | 第32-33页 |
| ·引物对LAMP 反应的影响 | 第33页 |
| ·甜菜碱对LAMP 反应的影响 | 第33页 |
| ·反应时间的优化 | 第33-34页 |
| ·引物特异性的检测 | 第34页 |
| ·LAMP 引物特异性的检测 | 第34页 |
| ·PCR 引物特异性的检测 | 第34页 |
| ·副溶血弧菌的灵敏度检测 | 第34-35页 |
| ·LAMP 检测副溶血弧菌基因组灵敏度 | 第34页 |
| ·PCR 检测副溶血弧菌基因组灵敏度 | 第34页 |
| ·LAMP 检测副溶血弧菌纯培养的灵敏度 | 第34-35页 |
| ·PCR 检测副溶血弧菌纯培养的灵敏度 | 第35页 |
| ·LAMP 扩增产物的分析 | 第35-36页 |
| ·LAMP 产物的可视结果分析 | 第35页 |
| ·LAMP 产物的凝胶成像分析 | 第35页 |
| ·LAMP 产物的荧光分析 | 第35页 |
| ·LAMP 产物酶切结果的分析 | 第35-36页 |
| ·人工污染贝肉中副溶血弧菌基因组DNA 提取方法比较 | 第36-38页 |
| ·人工污染贝肉 | 第36页 |
| ·试剂盒法(MiniBEST 细菌基因组 DNA 提取试剂盒) | 第36-37页 |
| ·溶剂提取热裂解法 | 第37页 |
| ·普通热裂解法 | 第37页 |
| ·蛋白酶K 法 | 第37-38页 |
| ·FDA 提取DNA 法 | 第38页 |
| ·苯酚-氯仿抽提法 | 第38页 |
| ·人工污染贝肉的检出限 | 第38-39页 |
| ·LAMP 法检测人工污染副溶血弧菌样品的检出限 | 第39页 |
| ·PCR 的检出限 | 第39页 |
| ·基于预增菌法LAMP 检测副溶血弧菌 | 第39页 |
| ·实际样品(贝肉)检测 | 第39-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-57页 |
| ·LAMP 反应条件的优化 | 第40-45页 |
| ·引物的优化 | 第40-42页 |
| ·Mg~(2+)浓度的优化 | 第42页 |
| ·dNTPs 浓度的优化 | 第42-43页 |
| ·Bst 酶的优化 | 第43页 |
| ·甜菜碱对LAMP 反应的影响 | 第43-44页 |
| ·反应温度的优化 | 第44页 |
| ·反应时间的优化 | 第44-45页 |
| ·LAMP 反应的最佳反应体系 | 第45页 |
| ·优化PCR 反应体系结果 | 第45-48页 |
| ·引物特异性的研究 | 第48页 |
| ·LAMP 引物特异性的研究 | 第48页 |
| ·PCR 引物特异性的研究 | 第48页 |
| ·副溶血弧菌灵敏度的研究 | 第48-51页 |
| ·LAMP 检测副溶血弧菌的基因组灵敏度 | 第48-49页 |
| ·PCR 检测副溶血弧菌基因组灵敏度 | 第49-50页 |
| ·LAMP 检测副溶血弧菌的灵敏度 | 第50页 |
| ·PCR 检测副溶血弧菌的灵敏度 | 第50-51页 |
| ·LAMP 扩增产物的分析 | 第51-53页 |
| ·LAMP 扩增的可视结果分析 | 第51-52页 |
| ·LAMP 扩增产物的电泳分析 | 第52页 |
| ·LAMP 产物的荧光分析 | 第52-53页 |
| ·LAMP 扩增产物酶切鉴定 | 第53页 |
| ·贝肉中副溶血弧菌DNA 提取方法比较 | 第53-54页 |
| ·人工污染贝肉检出限比较 | 第54-55页 |
| ·LAMP 检测贝肉中副溶血弧菌检出限 | 第54页 |
| ·PCR 检测贝肉中副溶血弧菌检出限 | 第54-55页 |
| ·副溶血性弧菌阳性样品增菌培养 | 第55页 |
| ·实际样品(贝肉)检测 | 第55-57页 |
| 4 讨论 | 第57-62页 |
| ·环介导等温扩增(LAMP)方法检测副溶血弧菌方法学评价 | 第57页 |
| ·环介导等温扩增(LAMP)引物的选择 | 第57-58页 |
| ·LAMP 体系优化 | 第58-59页 |
| ·模板 DNA 的提取 | 第59-60页 |
| ·增菌计数时间的选择 | 第60页 |
| ·LAMP 产物酶切电泳条件的选择 | 第60页 |
| ·LAMP 污染问题，原因，注意事项 | 第60-61页 |
| ·预增菌LAMP 检测 | 第61页 |
| ·基因组检测灵敏度和纯菌检测灵敏度之间的差异 | 第61-62页 |
| 5 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 硕士期间发表学术论文 | 第71-73页 |
| 作者简介 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
