| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 综述 | 第10-20页 |
| 1.1 前言 | 第10页 |
| 1.2 副溶血性弧菌简介 | 第10-12页 |
| 1.2.1 副溶血性弧菌的自然界分布 | 第10-11页 |
| 1.2.2 副溶血性弧菌对食品的污染情况 | 第11页 |
| 1.2.3 副溶血性弧菌的危害 | 第11页 |
| 1.2.4 副溶血性弧菌的控制 | 第11-12页 |
| 1.3 副溶血性弧菌的生物学特性 | 第12-14页 |
| 1.3.1 形态特征 | 第12页 |
| 1.3.2 培养特性 | 第12-13页 |
| 1.3.3 血清型 | 第13页 |
| 1.3.4 毒力因子 | 第13-14页 |
| 1.3.4.1 耐热直接溶血毒素 | 第13页 |
| 1.3.4.2 耐热相关溶血毒素 | 第13页 |
| 1.3.4.3 尿素酶 | 第13-14页 |
| 1.4 副溶血性弧菌的检测方法 | 第14-19页 |
| 1.4.1 LAMP检测方法 | 第14页 |
| 1.4.2 免疫学方法 | 第14-15页 |
| 1.4.2.1 间接免疫荧光抗体方法 | 第14页 |
| 1.4.2.2 间接酶联免疫吸附法 | 第14-15页 |
| 1.4.3 斑点ELISA法 | 第15页 |
| 1.4.4 荧光分析法 | 第15页 |
| 1.4.5 生理生化法 | 第15-16页 |
| 1.4.5.1 分离培养 | 第15-16页 |
| 1.4.5.2 涂片镜检 | 第16页 |
| 1.4.5.3 嗜盐性试验 | 第16页 |
| 1.4.5.4 生化试验 | 第16页 |
| 1.4.6 Southern杂交 | 第16-17页 |
| 1.4.7 夹心法杂交 | 第17页 |
| 1.4.8 动物毒性实验 | 第17-18页 |
| 1.4.9 细胞毒性实验 | 第18页 |
| 1.4.10 PCR法 | 第18-19页 |
| 1.5 创新特性 | 第19-20页 |
| 第二章 食源性副溶血性弧菌的双重PCR检测法的建立 | 第20-32页 |
| 2.1 材料及仪器 | 第20-23页 |
| 2.1.1 实验菌株 | 第20页 |
| 2.1.2 培养基 | 第20-21页 |
| 2.1.2.1 营养肉汤培养基 | 第20页 |
| 2.1.2.2 营养琼脂培养基 | 第20-21页 |
| 2.1.3 引物序列 | 第21页 |
| 2.1.4 样品 | 第21页 |
| 2.1.5 试剂药品 | 第21-22页 |
| 2.1.6 仪器设备 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-26页 |
| 2.2.1 细菌的活化培养 | 第23页 |
| 2.2.2 细菌基因组DNA的制备 | 第23页 |
| 2.2.3 双重PCR的体系建立及优化 | 第23-24页 |
| 2.2.3.1 模板量 | 第23-24页 |
| 2.2.3.2 退火温度 | 第24页 |
| 2.2.3.3 引物浓度 | 第24页 |
| 2.2.3.4 双重PCR初始扩增体系 | 第24页 |
| 2.2.3.5 PCR初始循环参数 | 第24页 |
| 2.2.4 单一PCR扩增 | 第24页 |
| 2.2.5 双重PCR特异性及灵敏度检测 | 第24-25页 |
| 2.2.6 人工污染红螺样品的制备及检出限检测 | 第25页 |
| 2.2.7 海水贝类的实际检测 | 第25页 |
| 2.2.8 生理生化鉴定验证 | 第25-26页 |
| 2.2.8.1 初步鉴定验证 | 第25-26页 |
| 2.2.8.2 确定鉴定验证 | 第26页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第26-31页 |
| 2.3.1 菌落计数结果 | 第26页 |
| 2.3.2 单一PCR扩增结果 | 第26-27页 |
| 2.3.2.1 t1基因初始扩增体系及条件 | 第26-27页 |
| 2.3.2.2 tdh基因初始扩增体系及条件 | 第27页 |
| 2.3.3 双重PCR优化结果 | 第27-29页 |
| 2.3.3.1 模板量优化 | 第28页 |
| 2.3.3.2 退火温度优化 | 第28页 |
| 2.3.3.3 引物浓度优化 | 第28-29页 |
| 2.3.4 特异性检测结果 | 第29-30页 |
| 2.3.5 灵敏度检测结果 | 第30页 |
| 2.3.6 人工污染红螺样品的检出限 | 第30-31页 |
| 2.4 本章小结 | 第31-32页 |
| 第三章 双重PCR快速检测新鲜海水贝类样品的实际应用 | 第32-41页 |
| 3.1 材料及仪器 | 第32-35页 |
| 3.1.1 实验菌株 | 第32页 |
| 3.1.2 培养基 | 第32-33页 |
| 3.1.2.1 副溶血性弧菌显色培养基 | 第32页 |
| 3.1.2.2 营养肉汤培养基 | 第32-33页 |
| 3.1.2.3 营养琼脂培养基 | 第33页 |
| 3.1.3 引物序列 | 第33页 |
| 3.1.4 样品 | 第33页 |
| 3.1.5 试剂药品 | 第33-34页 |
| 3.1.6 仪器设备 | 第34-35页 |
| 3.2 实验方法 | 第35-36页 |
| 3.2.1 双重PCR实际应用 | 第35-36页 |
| 3.1.1.1 抽取样品 | 第35页 |
| 3.1.1.2 前处理 | 第35页 |
| 3.1.1.3 增菌处理 | 第35-36页 |
| 3.1.1.4 菌液DNA提取 | 第36页 |
| 3.1.1.5 双重PCR检测 | 第36页 |
| 3.1.1.6 验证检测结果 | 第36页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第36-40页 |
| 3.3.1 双重PCR检测结果 | 第36-40页 |
| 3.3.1.1 双重PCR快速检测海水贝类中样品 | 第36-37页 |
| 3.3.1.2 生理生化实验验证结果 | 第37-39页 |
| 3.3.1.3 海水贝类样品的检出率 | 第39-40页 |
| 3.4 本章小结 | 第40-41页 |
| 第四章 结论 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-45页 |
| 致谢 | 第45页 |