| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 符号与缩略语说明 | 第10-11页 |
| 前言 | 第11-12页 |
| 第一章 谷氨酰胺转胺酶研究概况 | 第12-28页 |
| ·谷氨酰胺转胺酶的主要理化性质和作用机理 | 第12-13页 |
| ·谷氨酰胺转胺酶的来源及获取方法 | 第13-14页 |
| ·谷氨酰胺转胺酶的分离纯化 | 第14-15页 |
| ·谷氨酰胺转胺酶在工业中的应用 | 第15-18页 |
| ·微生物谷氨酰胺转胺酶基因克隆与表达 | 第18页 |
| ·谷氨酰胺转胺酶市场前景 | 第18-19页 |
| ·立题背景 | 第19-20页 |
| 参考文献 | 第20-28页 |
| 第二章 产谷氨酰胺转胺酶(TGase)芽孢杆菌的分离鉴定 | 第28-44页 |
| 1 材料与方法 | 第28-31页 |
| ·培养基与试剂 | 第28页 |
| ·芽孢杆菌的分离 | 第28页 |
| ·产谷氨酰胺转胺酶芽孢菌的筛选 | 第28-29页 |
| ·产谷氨酰胺转胺酶芽孢杆菌的重复验证 | 第29页 |
| ·产谷氨酰胺转胺酶芽孢菌株培养特征及生理生化鉴定 | 第29页 |
| ·产谷氨酰胺转胺酶芽孢杆菌16S rDNA序列的测定 | 第29-31页 |
| 2 部分产酶特性研究 | 第31-32页 |
| ·菌株1至8天产芽孢情况和pH值变化情况与产酶的关系 | 第31-32页 |
| ·通气量对MEPE0134产酶TGase的影响 | 第32页 |
| ·接种量对MEPE0134产酶TGase的影响 | 第32页 |
| ·培养温度对MEPE0134产酶TGase的影响 | 第32页 |
| ·培养液初始pH值对MEPE0134产酶TGase的影响 | 第32页 |
| ·硫酸铵沉淀浓缩粗酶液 | 第32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-41页 |
| ·产TGase的芽孢杆菌的分离 | 第32-33页 |
| ·菌株MEPE0134的形态及生理生化特征 | 第33-35页 |
| ·16S rDNA的扩增、序列测定 | 第35页 |
| ·构建系统发育树 | 第35-36页 |
| ·环境条件对菌株MEPE0134生长的影响 | 第36-40页 |
| ·生长曲线的测定 | 第40-41页 |
| 4 本章小结 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-44页 |
| 第三章 谷氨酰胺转胺酶(TGase)在大肠杆菌中的克隆、表达及性质分析 | 第44-64页 |
| 1 材料与方法 | 第44-52页 |
| ·培养基与试剂 | 第44页 |
| ·菌株与质粒 | 第44-45页 |
| ·菌体总DNA的提取 | 第45页 |
| ·大肠杆菌普通感受态细胞的制备及转化 | 第45页 |
| ·谷氨酰胺转胺酶(TGase)基因的PCR扩增,纯化及TA克隆 | 第45-47页 |
| ·tgll的PCR扩增 | 第45-46页 |
| l.5.2 PCR产物的纯化 | 第46页 |
| ·PCR产物加A尾 | 第46页 |
| ·酶连 | 第46-47页 |
| ·酶连产物的转化 | 第47页 |
| ·质粒DNA的小量提取 | 第47页 |
| ·测序验证 | 第47页 |
| ·表达载体pET-TGase的构建 | 第47-50页 |
| ·谷氨酰胺转胺酶的诱导表达 | 第50页 |
| ·重组蛋白的SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析 | 第50-51页 |
| ·表达条件的优化 | 第51-52页 |
| 2 结果与分析 | 第52-62页 |
| ·tgl的扩增和TA克隆 | 第52页 |
| ·表达载体pET-tgl构建 | 第52-54页 |
| ·tgl的诱导表达 | 第54页 |
| ·不同温度下诱导表达pET22-gtZ蛋白 | 第54-55页 |
| ·不同浓度IPTG诱导表达pET22-tgl蛋白 | 第55页 |
| ·用含Ni~(2+)的亲和层析介质纯化 | 第55-57页 |
| ·蛋白含量测定 | 第57页 |
| ·环境条件对酶活的影响测定 | 第57-62页 |
| 3 本章小结 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-64页 |
| 全文总结 | 第64-66页 |
| 问题与展望 | 第66-68页 |
| 创新之处 | 第68-70页 |
| 附录一 文中多用培养基、试剂及相关缓冲液配方 | 第70-73页 |
| 一 培养基 | 第70页 |
| 二 试剂 | 第70-73页 |
| 附录二 研究中获得的相关DNA序列 | 第73-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
