摘要 | 第3-4页 |
Abstract | 第4-5页 |
第一章 绪论 | 第9-20页 |
1.1 番茄红素简介 | 第9-12页 |
1.1.1 番茄红素的理化性质 | 第9页 |
1.1.2 番茄红素的生理功能 | 第9-11页 |
1.1.3 番茄红素的检测方法 | 第11页 |
1.1.4 国内外番茄红素的研究及市场应用概况 | 第11-12页 |
1.2 番茄红素的生产方法 | 第12-13页 |
1.2.1 天然提取法 | 第12页 |
1.2.2 化学合成法 | 第12页 |
1.2.3 微生物合成法 | 第12-13页 |
1.3 三孢布拉霉菌发酵生产番茄红素 | 第13-18页 |
1.3.1 三孢布拉霉 | 第13页 |
1.3.2 三孢布拉霉中番茄红素的合成途径 | 第13-14页 |
1.3.3 三孢布拉霉合成番茄红素关键基因的研究 | 第14-15页 |
1.3.4 三孢布拉霉合成番茄红素的代谢调控 | 第15-16页 |
1.3.5 高产番茄红素三孢布拉霉菌株的选育 | 第16-17页 |
1.3.6 三孢布拉霉菌发酵生产番茄红素存在的问题 | 第17-18页 |
1.4 本论文的研究意义和立题背景 | 第18-19页 |
1.5 本论文的研究内容 | 第19-20页 |
第二章 材料与方法 | 第20-29页 |
2.1 实验材料及方法 | 第20-21页 |
2.1.1 菌株 | 第20页 |
2.1.2 主要实验试剂 | 第20页 |
2.1.3 主要实验仪器设备 | 第20页 |
2.1.4 培养基 | 第20-21页 |
2.1.5 培养方法和培养条件 | 第21页 |
2.2 高产番茄红素菌株的诱变选育 | 第21-23页 |
2.2.1 发酵液的制备 | 第21页 |
2.2.2 筛选平板的准备 | 第21页 |
2.2.3 N~+离子注入诱变 | 第21页 |
2.2.4 存活率和突变率的计算 | 第21-22页 |
2.2.5 高产番茄红素三孢布拉霉负菌的筛选 | 第22页 |
2.2.6 生物量和番茄红素产量的测定 | 第22页 |
2.2.7 高产番茄红素突变株和出发菌株形态的光学显微镜观察 | 第22-23页 |
2.3 抗氧化酶SOD、CAT、POD比酶活的测定 | 第23-25页 |
2.3.1 胞内粗酶液的提取 | 第23页 |
2.3.2 发酵液中粗酶液的制备 | 第23页 |
2.3.3 超氧化物歧化酶(SOD)活力的测定 | 第23页 |
2.3.4 过氧化物酶(CAT)活力的测定 | 第23-24页 |
2.3.5 过氧化氢酶(POD)活力的测定 | 第24页 |
2.3.6 蛋白质含量的测定 | 第24-25页 |
2.4 番茄红素合成关键基因的转录分析 | 第25-26页 |
2.4.1 总RNA的提取和电泳分析 | 第25页 |
2.4.2 反转录和荧光定量PCR | 第25页 |
2.4.3 定量PCR结果分析方法 | 第25-26页 |
2.5 高产番茄红素突变株发酵培养基成分的优化 | 第26-27页 |
2.5.1 最佳碳源及最适添加量的确定 | 第26页 |
2.5.2 最佳氮源及最适添加量的确定 | 第26页 |
2.5.3 棉籽油添加量的确定 | 第26-27页 |
2.5.4 响应面法优化发酵培养基成分 | 第27页 |
2.6 高产番茄红素突变株发酵条件的优化 | 第27页 |
2.6.1 环化酶抑制剂 2-甲基咪唑添加时间的确定 | 第27页 |
2.6.2 正负菌间隔接种时间的确定 | 第27页 |
2.7 发酵液残糖含量的测定 | 第27-28页 |
2.8 30L搅拌罐发酵试验 | 第28-29页 |
2.8.1 培养基 | 第28页 |
2.8.2 培养方法和培养条件 | 第28-29页 |
第三章 结果与讨论 | 第29-51页 |
3.1 高产番茄红素突变株的选育 | 第29-32页 |
3.1.1 存活率曲线和诱变剂量的选择 | 第29页 |
3.1.2 麦汁平板初筛 | 第29-30页 |
3.1.3 固体发酵培养基复筛 | 第30页 |
3.1.4 接合试验验证 | 第30页 |
3.1.5 高产番茄红素突变株的产量 | 第30-31页 |
3.1.6 高产番茄红素突变株与出发菌株的菌丝形态对比 | 第31-32页 |
3.1.7 高产番茄红素突变株的遗传稳定性 | 第32页 |
3.2 抗氧化酶SOD、CAT、POD比酶活的测定 | 第32-35页 |
3.2.1 出发菌株和突变株菌丝体内SOD、CAT、POD比酶活的测定 | 第33页 |
3.2.2 出发菌株和突变株分别与正菌混合发酵时菌丝体SOD、CAT、POD比酶活的测定 | 第33-34页 |
3.2.3 出发菌株和突变株分别与正菌混合发酵时发酵液SOD、CAT、POD比酶活的测定 | 第34-35页 |
3.3 番茄红素合成关键酶基因转录水平分析 | 第35-38页 |
3.3.1 RT-PCR分析番茄红素合成关键酶基因的转录水平 | 第35-37页 |
3.3.2 高产突变株的发酵曲线 | 第37-38页 |
3.4 突变株B. trispora (-) 4c发酵培养基成分单因素优化 | 第38-42页 |
3.4.1 不同碳源对生物量和番茄红素产量的影响 | 第38-39页 |
3.4.2 不同氮源对生物量和番茄红素产量的影响 | 第39-40页 |
3.4.3 碳源添加量对生物量和番茄红素产量的影响 | 第40-41页 |
3.4.4 氮源添加量对生物量和番茄红素产量的影响 | 第41页 |
3.4.5 棉籽油添加量对生物量和番茄红素产量的影响 | 第41-42页 |
3.5 突变株B. trispora (-) 4c发酵培养基成分响应面优化 | 第42-46页 |
3.5.1 Central Composite Design试验设计 | 第42-43页 |
3.5.2 以番茄红素为响应值的结果分析 | 第43-44页 |
3.5.3 以生物量为响应值的结果分析 | 第44页 |
3.5.4 回归模型的响应面图 | 第44-46页 |
3.5.5 验证试验 | 第46页 |
3.6 突变株B. trispora (-) 4c发酵条件的优化 | 第46-48页 |
3.6.1 正负菌间隔接种时间的确定 | 第46页 |
3.6.2 环化酶抑制剂 2-甲基咪唑添加时间的确定 | 第46-47页 |
3.6.3 优化前后残糖含量和p H的变化 | 第47-48页 |
3.7 突变株 30 L搅拌罐发酵试验 | 第48-51页 |
3.7.1 搅拌桨叶的选择 | 第49页 |
3.7.2 发酵罐发酵正负菌间隔接种时间的优化 | 第49-50页 |
3.7.3 发酵罐发酵环化酶抑制剂添加时间的优化 | 第50-51页 |
主要结论与展望 | 第51-52页 |
致谢 | 第52-53页 |
参考文献 | 第53-57页 |
附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第57页 |