| 致谢 | 第4-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 缩写和符号清单 | 第16-18页 |
| 1 引言 | 第18-20页 |
| 2 文献综述 | 第20-39页 |
| 2.1 黄曲霉毒素简介 | 第20-26页 |
| 2.1.1 产生 | 第20页 |
| 2.1.2 结构 | 第20-21页 |
| 2.1.3 理化性质 | 第21页 |
| 2.1.4 急性毒性 | 第21-22页 |
| 2.1.5 致癌性 | 第22页 |
| 2.1.6 对农业的影响 | 第22页 |
| 2.1.7 限量标准 | 第22-25页 |
| 2.1.8 污染现状 | 第25-26页 |
| 2.2 黄曲霉毒素的检测技术 | 第26-29页 |
| 2.2.1 薄层色谱法 | 第26页 |
| 2.2.2 液相色谱或液质联用法 | 第26-27页 |
| 2.2.3 免疫分析法 | 第27-29页 |
| 2.3 黄曲霉毒素抗原合成和抗体制备研究进展 | 第29-33页 |
| 2.3.1 抗原制备 | 第29-31页 |
| 2.3.2 抗体制备 | 第31-33页 |
| 2.4 黄曲霉毒素酶联免疫技术研究进展 | 第33-37页 |
| 2.5 黄曲霉毒素胶体金免疫层析法研究进展 | 第37-38页 |
| 2.6 课题研究的目的和意义 | 第38-39页 |
| 3 黄曲霉毒素抗原合成及抗体制备 | 第39-56页 |
| 3.1 材料 | 第39-40页 |
| 3.1.1 仪器及耗材 | 第39-40页 |
| 3.1.2 主要试剂和药品 | 第40页 |
| 3.1.3 实验动物与细胞 | 第40页 |
| 3.2 实验方法 | 第40-50页 |
| 3.2.1 溶液配制 | 第40-42页 |
| 3.2.2 AFB_1肟的制备合成 | 第42页 |
| 3.2.3 AFB_1肟的提取 | 第42-43页 |
| 3.2.4 AFB_1O与载体蛋白的连接 | 第43页 |
| 3.2.5 AFB_1O-BSA鉴定 | 第43页 |
| 3.2.6 免疫程序 | 第43-45页 |
| 3.2.7 饲养细胞的收集和培养 | 第45页 |
| 3.2.8 细胞融合 | 第45-46页 |
| 3.2.9 细胞融合后的筛选和扩大培养 | 第46-47页 |
| 3.2.10 亚克隆 | 第47-48页 |
| 3.2.11 腹水的制备 | 第48页 |
| 3.2.12 抗体纯化 | 第48-49页 |
| 3.2.13 抗体鉴定 | 第49页 |
| 3.2.14 单克隆抗体的亲和力测定 | 第49-50页 |
| 3.2.15 灵敏度及交叉率测定 | 第50页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第50-55页 |
| 3.3.1 AFB_1肟的制备 | 第50-51页 |
| 3.3.2 抗原的合成及鉴定 | 第51-52页 |
| 3.3.3 免疫小鼠血清效价的鉴定 | 第52-53页 |
| 3.3.4 细胞株筛选 | 第53页 |
| 3.3.5 抗体的制备和鉴定 | 第53-54页 |
| 3.3.6 与同类型的单抗比较 | 第54-55页 |
| 3.4 小结 | 第55-56页 |
| 4 食品及饲料中AFB_1检测试剂盒的制备 | 第56-70页 |
| 4.1 材料 | 第57-58页 |
| 4.1.1 仪器和耗材 | 第57页 |
| 4.1.2 主要试剂和药品 | 第57页 |
| 4.1.3 溶液配方 | 第57-58页 |
| 4.2 实验方法 | 第58-61页 |
| 4.2.1 酶标抗原的合成 | 第58-59页 |
| 4.2.2 酶标板的制备 | 第59页 |
| 4.2.3 酶联免疫检测步骤 | 第59页 |
| 4.2.4 包被缓冲液的优化 | 第59页 |
| 4.2.5 最佳反应pH值的优化 | 第59-60页 |
| 4.2.6 抗体包被量、HRP-BSA-AFB_1用量的优化 | 第60页 |
| 4.2.7 标准品稀释液的优化 | 第60页 |
| 4.2.8 标准曲线的建立 | 第60页 |
| 4.2.9 实际样品检测 | 第60-61页 |
| 4.2.10 特异性测定 | 第61页 |
| 4.2.11 稳定性实验 | 第61页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第61-69页 |
| 4.3.1 包被缓冲液的优化 | 第61-63页 |
| 4.3.2 最佳反应pH值的优化 | 第63页 |
| 4.3.3 抗体包被量及HRP-BSA-AFB_1用量优化 | 第63-64页 |
| 4.3.4 标准曲线的建立 | 第64-65页 |
| 4.3.5 样品检测限 | 第65页 |
| 4.3.6 准确度和精密度 | 第65-67页 |
| 4.3.7 交叉反应率 | 第67页 |
| 4.3.8 HPLC-MS/MS与ELISA结果比对 | 第67-68页 |
| 4.3.9 储存稳定性 | 第68-69页 |
| 4.4 小结 | 第69-70页 |
| 5 婴幼儿食品中AFB1检测试剂盒的制备 | 第70-82页 |
| 5.1 材料 | 第70-71页 |
| 5.1.1 仪器和耗材 | 第70页 |
| 5.1.2 主要试剂和药品 | 第70-71页 |
| 5.1.3 溶液配方 | 第71页 |
| 5.2 实验方法 | 第71-74页 |
| 5.2.1 不同模式ELISA的比较 | 第71-72页 |
| 5.2.2 抗体及酶标抗原用量的优化 | 第72页 |
| 5.2.3 样品提取液的优化 | 第72-73页 |
| 5.2.4 标准曲线的建立 | 第73页 |
| 5.2.5 实际样品检测 | 第73页 |
| 5.2.6 特异性测定 | 第73-74页 |
| 5.2.7 稳定性实验 | 第74页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第74-81页 |
| 5.3.1 三种检测模式比较结果 | 第74-75页 |
| 5.3.2 一抗及酶标抗原用量的优化 | 第75-77页 |
| 5.3.3 样品提取液的优化 | 第77页 |
| 5.3.4 标准曲线的建立 | 第77-78页 |
| 5.3.5 样品检测限 | 第78页 |
| 5.3.6 准确度和精密度 | 第78-79页 |
| 5.3.7 交叉反应率 | 第79-80页 |
| 5.3.8 储存稳定性 | 第80页 |
| 5.3.9 讨论 | 第80-81页 |
| 5.4 小结 | 第81-82页 |
| 6 植物油中AFB_1检测卡的制备 | 第82-97页 |
| 6.1 材料 | 第82-83页 |
| 6.1.1 仪器和耗材 | 第82-83页 |
| 6.1.2 主要试剂和药品 | 第83页 |
| 6.1.3 溶液配方 | 第83页 |
| 6.2 实验方法 | 第83-87页 |
| 6.2.1 胶体金的制备 | 第83-84页 |
| 6.2.2 胶体金的鉴定 | 第84页 |
| 6.2.3 抗体标记的胶体金的制备 | 第84页 |
| 6.2.4 检测试纸条制备 | 第84-85页 |
| 6.2.5 检测结果的分析 | 第85页 |
| 6.2.6 振荡时间和水/油比的优化 | 第85页 |
| 6.2.7 油中AFB_1的标准曲线测定 | 第85-86页 |
| 6.2.8 油中AFB_1的回收率测定 | 第86页 |
| 6.2.9 假阴性假阳性实验 | 第86页 |
| 6.2.10 样品验证 | 第86页 |
| 6.2.11 加速实验 | 第86-87页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第87-96页 |
| 6.3.1 胶体金制备 | 第87页 |
| 6.3.2 胶体金的鉴定及抗体标记 | 第87-88页 |
| 6.3.3 检测卡的制备 | 第88-89页 |
| 6.3.4 可能的检测原理 | 第89-90页 |
| 6.3.5 样品制备过程的优化 | 第90-91页 |
| 6.3.6 油中AFB_1的检测标准曲线 | 第91-93页 |
| 6.3.7 油中AFB_1的回收率测定 | 第93页 |
| 6.3.8 假阴性假阳性实验 | 第93页 |
| 6.3.9 样品验证 | 第93-95页 |
| 6.3.10 加速实验 | 第95页 |
| 6.3.11 与传统的方法比较 | 第95-96页 |
| 6.4 小结 | 第96-97页 |
| 7 AFM_1和AFB_1总量试剂盒的制备 | 第97-113页 |
| 7.1 材料 | 第97-98页 |
| 7.1.1 仪器和耗材 | 第97页 |
| 7.1.2 主要试剂和药品 | 第97-98页 |
| 7.1.3 主要试剂和药品 | 第98页 |
| 7.1.4 溶液配方 | 第98页 |
| 7.2 实验方法 | 第98-101页 |
| 7.2.1 抗原及抗体的制备 | 第98页 |
| 7.2.2 酶标板的制备 | 第98-99页 |
| 7.2.3 酶联免疫检测步骤 | 第99页 |
| 7.2.4 二抗、抗体和酶标抗原用量的优化 | 第99页 |
| 7.2.5 标准品稀释液的优化 | 第99页 |
| 7.2.6 标准曲线的建立 | 第99-100页 |
| 7.2.7 液态奶脱脂和不脱脂的影响测定 | 第100页 |
| 7.2.8 实际样品检测 | 第100页 |
| 7.2.9 与进口试剂盒的检测方法的比对 | 第100-101页 |
| 7.2.10 稳定性实验 | 第101页 |
| 7.3 结果与讨论 | 第101-112页 |
| 7.3.1 抗原和抗体的鉴定 | 第101-102页 |
| 7.3.2 抗原抗体用量的优化 | 第102-104页 |
| 7.3.3 标准曲线的建立 | 第104-106页 |
| 7.3.4 液态奶脱脂和不脱脂的影响测定 | 第106-107页 |
| 7.3.5 样品检测限、准确度和精密度 | 第107-108页 |
| 7.3.6 与进口试剂盒的检测方法的比对 | 第108-111页 |
| 7.3.7 稳定性实验 | 第111-112页 |
| 7.4 小结 | 第112-113页 |
| 8 结论 | 第113-114页 |
| 参考文献 | 第114-130页 |
| 附录A 缓冲液配方 | 第130-133页 |
| 附录B Bradford法测蛋白含量 | 第133-134页 |
| 附录C 非变性凝胶电泳操作流程 | 第134-138页 |
| 作者简历及在学研究成果 | 第138-142页 |
| 学位论文数据集 | 第142页 |
