| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-16页 |
| ·高通量筛选技术简介 | 第8-9页 |
| ·基于深孔板的高通量筛选技术 | 第9-12页 |
| ·MTP的氧传递性能 | 第11页 |
| ·高通量分析检测技术 | 第11-12页 |
| ·展望 | 第12页 |
| ·普鲁兰酶简介 | 第12-13页 |
| ·酶分子体外定向进化 | 第13-14页 |
| ·立题依据及意义 | 第14页 |
| ·主要研究内容 | 第14-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-26页 |
| ·材料 | 第16-17页 |
| ·菌株与质粒 | 第16页 |
| ·主要仪器与设备 | 第16页 |
| ·主要试剂 | 第16页 |
| ·培养基 | 第16-17页 |
| ·主要溶液 | 第17页 |
| ·实验方法 | 第17-23页 |
| ·MTP的kLa的测定 | 第17-18页 |
| ·质粒提取 | 第18页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞转化 | 第18页 |
| ·菌落PCR | 第18-19页 |
| ·pET-28a(+)-pelB质粒的构建 | 第19-20页 |
| ·pET-28a(+)-pelB-pul质粒的构建 | 第20-22页 |
| ·亚细胞组分的制备（上清、周质） | 第22页 |
| ·突变文库的构建——易错PCR | 第22-23页 |
| ·突变文库的培养 | 第23页 |
| ·分析方法 | 第23-26页 |
| ·菌体生物量的测定 | 第23-24页 |
| ·普鲁兰酶酶活的测定 | 第24-25页 |
| ·重组普鲁兰酶的纯化 | 第25页 |
| ·重组普鲁兰酶酶学性质分析 | 第25页 |
| ·统计学分析 | 第25-26页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第26-44页 |
| ·基础参数的研究 | 第26-32页 |
| ·透气膜的选择 | 第26-28页 |
| ·培养设备的选择 | 第28页 |
| ·MTP性能参数的测定 | 第28-29页 |
| ·MTP平行性的确定 | 第29页 |
| ·高传氧系数MTP的设计 | 第29-31页 |
| ·普鲁兰酶酶活高通量检测方法的建立 | 第31页 |
| ·小结 | 第31-32页 |
| ·普鲁兰酶的异源表达 | 第32-39页 |
| ·pET-28a(+)-pelB质粒的构建 | 第32-33页 |
| ·pET-28a(+)-pelB-pul的构建 | 第33-34页 |
| ·重组E.coli BL21(DE3)(pET-28a(+)-pel B-pul)的构建 | 第34页 |
| ·重组菌摇瓶发酵条件的确定 | 第34-37页 |
| ·重组菌的发酵过程曲线 | 第37页 |
| ·Scale-down to MTP | 第37-38页 |
| ·小结 | 第38-39页 |
| ·突变体文库的构建与筛选 | 第39-42页 |
| ·易错PCR结果分析 | 第39页 |
| ·突变体文库鉴定与分析 | 第39-40页 |
| ·突变文库的高通量筛选 | 第40-42页 |
| ·进化酶序列分析 | 第42页 |
| ·重组普鲁兰酶的纯化与酶学性质分析 | 第42-44页 |
| ·重组普鲁兰酶的纯化 | 第42页 |
| ·重组普鲁兰酶酶学性质分析 | 第42-44页 |
| 主要结论与展望 | 第44-46页 |
| 主要结论 | 第44-45页 |
| 展望 | 第45-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第51页 |