| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-14页 |
| ·L-ASN概述 | 第9-12页 |
| ·L-ASN简介 | 第9页 |
| ·L-ASN的应用 | 第9-11页 |
| ·L-ASN在医药领域的应用 | 第9-10页 |
| ·L-ASN在食品领域的应用 | 第10-11页 |
| ·L-ASN的发酵生产 | 第11-12页 |
| ·野生菌发酵生产 | 第11-12页 |
| ·重组菌发酵生产 | 第12页 |
| ·枯草芽孢杆菌表达系统 | 第12页 |
| ·立题依据 | 第12-13页 |
| ·本论文的主要研究内容 | 第13-14页 |
| 第二章 材料与方法 | 第14-20页 |
| ·主要材料 | 第14-15页 |
| ·主要菌株和质粒 | 第14页 |
| ·试剂 | 第14页 |
| ·主要仪器 | 第14页 |
| ·培养基 | 第14-15页 |
| ·实验方法 | 第15-20页 |
| ·ansZ基因PCR扩增 | 第15页 |
| ·pMA5-ansZ、pMA5-ansZ△(SP)表达载体及信号肽表达载体的构建 | 第15页 |
| ·枯草芽孢杆菌感受态的制备与转化 | 第15-16页 |
| ·重组 L-ASN 的发酵 | 第16页 |
| ·胞外重组L-ASN的分离纯化 | 第16页 |
| ·酶活、蛋白浓度及SDS-PAGE电泳检测 | 第16-17页 |
| ·L-ASN酶活测定 | 第16-17页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第17页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第17页 |
| ·酶学性质研究方法 | 第17-18页 |
| ·重组L-ASN最适反应温度及温度稳定性测定 | 第17页 |
| ·重组L-ASN最适反应pH及pH稳定性测定 | 第17-18页 |
| ·螯合剂、金属离子对L-ASN的影响 | 第18页 |
| ·重组L-ASN动力学常数的测定 | 第18页 |
| ·蔗糖浓度测定 | 第18页 |
| ·重组菌WB-H的等离子诱变及遗传稳定性验证 | 第18-20页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第20-37页 |
| ·ansZ基因在B.subtilis WB600 中的表达及信号肽优化 | 第20-24页 |
| ·ansZ基因的表达载体的构建及表达 | 第20-21页 |
| ·ansZ基因表达信号肽的优化 | 第21-24页 |
| ·信号肽的筛选 | 第21-22页 |
| ·信号肽对L-ASN表达的影响 | 第22-24页 |
| ·重组L-ASN的纯化及酶学性质 | 第24-28页 |
| ·重组L-ASN的纯化 | 第24-25页 |
| ·L-ASN的最适反应温度和热稳定性 | 第25-26页 |
| ·L-ASN的最适反应pH和pH稳定性 | 第26-27页 |
| ·金属离子及EDTA对L-ASN活力的影响 | 第27页 |
| ·L-ASN动力学参数 | 第27-28页 |
| ·重组菌WB-H的等离子诱变及突变株的发酵 | 第28-37页 |
| ·重组菌WB-H的等离子诱变 | 第28-30页 |
| ·致死曲线的测定 | 第28-29页 |
| ·突变菌株的筛选 | 第29页 |
| ·突变株的发酵特性研究 | 第29-30页 |
| ·突变株遗传稳定性分析 | 第30页 |
| ·突变株摇瓶发酵优化 | 第30-34页 |
| ·接种量优化 | 第31页 |
| ·碳源种类及碳源浓度的优化 | 第31-32页 |
| ·氮源种类及氮源浓度的优化 | 第32-34页 |
| ·3L罐放大实验 | 第34-37页 |
| 主要结论与展望 | 第37-39页 |
| 主要结论 | 第37-38页 |
| 展望 | 第38-39页 |
| 致谢 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-44页 |
| 附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第44页 |