| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-27页 |
| 1.1 毕赤酵母表达系统概述 | 第12-14页 |
| 1.1.1 毕赤酵母的遗传表型 | 第12-13页 |
| 1.1.2 影响外源蛋白表达的因素 | 第13-14页 |
| 1.2 毕赤酵母高密度发酵技术 | 第14-22页 |
| 1.2.1 毕赤酵母高密度发酵的一般工艺过程 | 第14-17页 |
| 1.2.2 影响毕赤酵母高密度发酵的因素 | 第17-19页 |
| 1.2.2.1 培养基 | 第17-18页 |
| 1.2.2.2 诱导期培养p H | 第18页 |
| 1.2.2.3 诱导期培养温度 | 第18-19页 |
| 1.2.2.4 溶氧控制 | 第19页 |
| 1.2.3 毕赤酵母高密度发酵过程控制 | 第19-21页 |
| 1.2.3.1 单一甲醇补料 | 第20页 |
| 1.2.3.2 甲醇混合补料 | 第20-21页 |
| 1.2.4 毕赤酵母细胞高密度发酵过程中存在的问题 | 第21-22页 |
| 1.3 漆酶的研究进展与应用 | 第22-24页 |
| 1.3.1 漆酶的简介 | 第22-23页 |
| 1.3.2 漆酶基因的表达 | 第23页 |
| 1.3.3 漆酶的工业应用 | 第23页 |
| 1.3.4 Lac TT的简介 | 第23-24页 |
| 1.4 技术路线 | 第24-25页 |
| 1.5 本课题研究的意义及主要内容 | 第25-27页 |
| 1.5.1 本课题的研究意义 | 第25-26页 |
| 1.5.2 本课题的主要研究内容 | 第26-27页 |
| 第二章 材料与方法 | 第27-38页 |
| 2.1 实验菌株 | 第27页 |
| 2.2 主要试剂 | 第27页 |
| 2.3 主要仪器与设备 | 第27-28页 |
| 2.4 培养基及溶液 | 第28-30页 |
| 2.4.1 培养基 | 第28-29页 |
| 2.4.2 溶液 | 第29-30页 |
| 2.5 培养方法 | 第30-32页 |
| 2.5.1 菌种保藏 | 第30页 |
| 2.5.2 YPD平板菌种活化 | 第30-31页 |
| 2.5.3 摇瓶发酵方法 | 第31页 |
| 2.5.4 上罐发酵方法 | 第31-32页 |
| 2.6 检测方法 | 第32-38页 |
| 2.6.1 菌体量检测 | 第32页 |
| 2.6.2 漆酶酶活检测 | 第32-33页 |
| 2.6.3 细胞破碎方法 | 第33页 |
| 2.6.4 AOX活力测定和标准曲线的制备 | 第33-34页 |
| 2.6.5 ATP浓度测定和标准曲线的制备 | 第34-35页 |
| 2.6.6 蛋白酶活力测定和标准曲线的制备 | 第35-36页 |
| 2.6.7 蛋白浓度测定 | 第36-38页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第38-61页 |
| 3.1 引言 | 第38-39页 |
| 3.2 诱导初始菌体密度对重组毕赤酵母生长和产Lac TT的影响 | 第39-41页 |
| 3.2.1 Lac TT单拷贝和四拷贝重组毕赤酵母生长和产酶比较 | 第39-40页 |
| 3.2.2 诱导初始菌体密度对Lac TT四拷贝重组毕赤酵母生长和产酶的影响 | 第40-41页 |
| 3.3 诱导期间甲醇添加量对毕赤酵母生长和产Lac TT的影响 | 第41-42页 |
| 3.4 诱导p H对重组毕赤酵母分泌表达Lac TT的影响 | 第42-45页 |
| 3.4.1 不同诱导p H对重组毕赤酵母生长的影响 | 第42-43页 |
| 3.4.2 不同诱导p H对重组毕赤酵母发酵表达漆酶的影响 | 第43-44页 |
| 3.4.3 不同诱导p H对重组毕赤酵母胞内AOX比活力的影响 | 第44-45页 |
| 3.4.4 不同诱导p H对重组毕赤酵母胞外蛋白酶活力的影响 | 第45页 |
| 3.5 诱导温度对重组毕赤酵母高密度发酵产Lac TT的影响 | 第45-50页 |
| 3.5.1 诱导温度对重组毕赤酵母生长的影响 | 第46-47页 |
| 3.5.2 诱导温度对重组毕赤酵母发酵产漆酶的影响 | 第47-48页 |
| 3.5.3 诱导温度对重组毕赤酵母胞内AOX比活力的影响 | 第48-49页 |
| 3.5.4 诱导温度对重组毕赤酵母胞外蛋白酶活力的影响 | 第49-50页 |
| 3.6 混合补料策略对重组毕赤酵母高密度发酵生产Lac TT的影响 | 第50-58页 |
| 3.6.1 摇瓶发酵 | 第50-52页 |
| 3.6.2 10L罐高密度发酵 | 第52-58页 |
| 3.6.2.1 甘油甲醇混合补料策略对重组毕赤酵母菌体生长的影响 | 第53页 |
| 3.6.2.2 甘油甲醇混合补料策略对重组毕赤酵母产漆酶的影响 | 第53-55页 |
| 3.6.2.3 甘油甲醇混合补料对重组毕赤酵母发酵过程中胞内AOX比活力的影响 | 第55-56页 |
| 3.6.2.4 甘油甲醇混合补料对重组毕赤酵母发酵过程中胞内ATP比浓度的影响 | 第56-57页 |
| 3.6.2.5 甘油甲醇混合补料对重组毕赤酵母发酵过程中胞外蛋白酶活力的影响463.7 发酵工艺优化结果 | 第57-58页 |
| 3.7 发酵工艺优化结果 | 第58-59页 |
| 3.8 小结 | 第59-61页 |
| 结论与展望 | 第61-64页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 本论文的创新之处 | 第62页 |
| 展望 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-70页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 附件 | 第72页 |
