裂殖壶菌脂肪酶基因在毕赤酵母中的表达及酶学性质的研究
| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 中英文缩写词对照表 | 第5-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-18页 |
| 1.1 裂殖壶菌概述 | 第9-12页 |
| 1.1.1 裂殖壶菌相关研究进展 | 第9-10页 |
| 1.1.2 裂殖壶菌代谢工程研究进展 | 第10-12页 |
| 1.2 微生物脂肪酶的研究进展 | 第12-16页 |
| 1.2.1 微生物脂肪酶的分子结构和催化机制 | 第13-14页 |
| 1.2.2 微生物脂肪酶性质及活性检测 | 第14-15页 |
| 1.2.3 脂肪酶基因重组表达 | 第15-16页 |
| 1.3 本课题的立题依据与研究内容 | 第16-18页 |
| 1.3.1 课题的立题依据 | 第16-17页 |
| 1.3.2 课题主要研究内容 | 第17-18页 |
| 第二章 裂殖壶菌脂肪酶基因的预测及克隆 | 第18-29页 |
| 2.1 引言 | 第18页 |
| 2.2 实验材料与设备 | 第18-19页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第18页 |
| 2.2.2 主要试剂和仪器 | 第18页 |
| 2.2.3 培养基和菌株生长条件 | 第18-19页 |
| 2.2.4 生物信息学分析 | 第19页 |
| 2.3 实验方法 | 第19-23页 |
| 2.3.1 目的基因的扩增 | 第19-21页 |
| 2.3.2 重组质粒的构建 | 第21-23页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第23-28页 |
| 2.4.1 脂肪酶基因序列分析 | 第23-27页 |
| 2.4.2 重组质粒的验证 | 第27-28页 |
| 2.5 本章小结 | 第28-29页 |
| 第三章 裂殖壶菌脂肪酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第29-39页 |
| 3.1 引言 | 第29页 |
| 3.2 实验材料与设备 | 第29-30页 |
| 3.2.1 菌株和质粒 | 第29页 |
| 3.2.2 主要试剂和仪器 | 第29页 |
| 3.2.3 培养基和试剂的配制 | 第29-30页 |
| 3.2.4 SDS-PAGE | 第30页 |
| 3.3 实验方法 | 第30-34页 |
| 3.3.1 毕赤酵母感受态细胞的制备及转化 | 第30-31页 |
| 3.3.2 重组子的筛选 | 第31页 |
| 3.3.3 重组毕赤酵母表达载体的PCR鉴定 | 第31-32页 |
| 3.3.4 表达产物SDS-PAGE电泳检测 | 第32页 |
| 3.3.5 转化子脂肪酶活性检测 | 第32-33页 |
| 3.3.6 重组转化子最佳发酵时间 | 第33-34页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第34-38页 |
| 3.4.1 脂肪酶在毕赤酵母中的表达 | 第34-36页 |
| 3.4.2 脂肪酶活性平板筛选阳性克隆 | 第36页 |
| 3.4.3 高效液相检测重组脂肪酶活性 | 第36-37页 |
| 3.4.4 重组转化子最佳发酵时间 | 第37-38页 |
| 3.5 本章小结 | 第38-39页 |
| 第四章 裂殖壶菌脂肪酶的性质研究 | 第39-50页 |
| 4.1 引言 | 第39页 |
| 4.2 实验材料与设备 | 第39-40页 |
| 4.2.1 菌株和质粒 | 第39页 |
| 4.2.2 主要试剂和仪器 | 第39页 |
| 4.2.3 缓冲溶液和乳化液 | 第39-40页 |
| 4.3 实验方法 | 第40-42页 |
| 4.3.1 脂肪酶酶活检测方法 | 第40-41页 |
| 4.3.2 重组脂肪酶纯化 | 第41页 |
| 4.3.3 重组脂肪酶最适温度以及热稳定性 | 第41-42页 |
| 4.3.4 重组脂肪酶最适pH以及pH稳定性 | 第42页 |
| 4.3.5 重组脂肪酶底物特异性 | 第42页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第42-49页 |
| 4.4.1 重组脂肪酶的SDS-PAGE分析 | 第42-44页 |
| 4.4.2 重组脂肪酶最适温度及热稳定性 | 第44-45页 |
| 4.4.3 重组脂肪酶最适pH值及pH值稳定性 | 第45-46页 |
| 4.4.4 重组脂肪酶底物特异性 | 第46-49页 |
| 4.5 本章小结 | 第49-50页 |
| 主要结论与展望 | 第50-52页 |
| 主要结论 | 第50页 |
| 展望 | 第50-52页 |
| 致谢 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-60页 |
| 附录1:作者在攻读硕士学位期间发表的论文及成果 | 第60-61页 |
| 附录2:脂肪酶基因序列及翻译 | 第61-62页 |
