| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第9-15页 |
| 1.1 谷氨酰胺转氨酶概述 | 第9-11页 |
| 1.1.1 谷氨酰胺转氨酶的催化特性及来源 | 第9页 |
| 1.1.2 谷氨酰胺转氨酶的应用 | 第9-10页 |
| 1.1.3 谷氨酰胺转氨酶活化机制 | 第10页 |
| 1.1.4 谷氨酰胺转氨酶发酵现状及表达策略 | 第10-11页 |
| 1.2 解脂耶氏酵母表达系统 | 第11-13页 |
| 1.2.1 解脂耶氏酵母简介 | 第11-12页 |
| 1.2.2 表达元件 | 第12-13页 |
| 1.3 立题依据及意义 | 第13页 |
| 1.4 本论文的主要研究内容 | 第13-15页 |
| 第二章 材料与方法 | 第15-25页 |
| 2.1 材料与方法 | 第15-17页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第15页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第15-16页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第16页 |
| 2.1.4 培养基 | 第16-17页 |
| 2.2 操作方法 | 第17-25页 |
| 2.2.1 DNA操作 | 第17-19页 |
| 2.2.2 S.mobaraense mpro-TGase基因的克隆及表达 | 第19-21页 |
| 2.2.3 表达活性TGase质粒载体的构建及转化 | 第21-22页 |
| 2.2.4 定点突变表达载体的构建 | 第22页 |
| 2.2.5 培养方法 | 第22页 |
| 2.2.6 谷氨酰胺转氨酶酶活力的测定 | 第22页 |
| 2.2.7 SDS-PAGE凝胶电泳检测 | 第22-23页 |
| 2.2.8 Y.lipolytica基因组提取 | 第23页 |
| 2.2.9 Y.lipolytica RNA提取 | 第23页 |
| 2.2.10 蛋白质浓度的测定 | 第23页 |
| 2.2.11 酶的分离纯化 | 第23页 |
| 2.2.12 酶学性质的研究 | 第23-25页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第25-42页 |
| 3.1 S.mobaraense mpro-TGase在Y.lipolytica中的表达 | 第25-31页 |
| 3.1.1 S.mobaraense mpro-TGase基因的克隆和载体的构建 | 第25页 |
| 3.1.2 S.mobaraense mpro-TGase基因在Y.lipolytica中表达 | 第25-26页 |
| 3.1.3 酶原区替换基因在Y.lipolytica中的表达 | 第26-28页 |
| 3.1.4 拷贝数分析 | 第28-29页 |
| 3.1.5 转录水平分析 | 第29-30页 |
| 3.1.6 酶原区关键氨基酸的研究 | 第30-31页 |
| 3.2 S.mobaraense TGase在Y.lipolytica中的活性表达 | 第31-35页 |
| 3.2.1 插入Kex2蛋白酶识别位点重组菌的构建与分泌表达 | 第31-32页 |
| 3.2.2 共表达hpro-TGase与蛋白酶TAMEP重组菌的构建与分泌表达 | 第32-33页 |
| 3.2.3 酶反应动力学分析 | 第33-34页 |
| 3.2.4 降解问题分析 | 第34-35页 |
| 3.3 分子改造提高TGase的催化活性 | 第35-42页 |
| 3.3.1 定点突变体的分泌表达 | 第35-38页 |
| 3.3.2 酶反应动力学分析 | 第38-39页 |
| 3.3.3 最适反应温度和热稳定性 | 第39-40页 |
| 3.3.4 最适反应pH和pH稳定性 | 第40页 |
| 3.3.5 催化效率和稳定性机制分析 | 第40-42页 |
| 主要结论与展望 | 第42-44页 |
| 主要结论 | 第42-43页 |
| 展望 | 第43-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-50页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第50页 |
