| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 主要缩写词 | 第6-10页 |
| 第一章 引言 | 第10-23页 |
| 1.1 呋喃唑酮的研究现状 | 第10-15页 |
| 1.1.1 呋喃唑酮的理化性质及生物学特性 | 第10-12页 |
| 1.1.2 呋喃唑酮及其代谢物检测方法的研究进展 | 第12-15页 |
| 1.2 小分子抗体技术研究进展 | 第15-19页 |
| 1.2.1 Fab抗体 | 第16页 |
| 1.2.2 单链抗体 | 第16-18页 |
| 1.2.3 其他类型工程抗体 | 第18-19页 |
| 1.3 核糖体展示技术的发展 | 第19-21页 |
| 1.3.1 核糖体展示技术的基本原理 | 第19-20页 |
| 1.3.2 核糖体展示技术的优点 | 第20页 |
| 1.3.3 核糖体展示技术的研究进展 | 第20页 |
| 1.3.4 核糖体展示技术存在的问题 | 第20-21页 |
| 1.4 本课题主要研究内容及创新之处 | 第21-23页 |
| 1.4.1 本课题的研究背景 | 第21页 |
| 1.4.2 主要研究内容 | 第21-22页 |
| 1.4.3 创新之处 | 第22-23页 |
| 第二章 抗呋喃唑酮单链抗体的筛选 | 第23-47页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-26页 |
| 2.1.1 实验试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.2 主要溶液和试剂配制 | 第24-25页 |
| 2.1.3 仪器设备 | 第25-26页 |
| 2.1.4 菌株与质粒 | 第26页 |
| 2.1.5 细胞株 | 第26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-36页 |
| 2.2.1 呋喃唑酮抗原合成 | 第26-27页 |
| 2.2.2 偶联产物的检测 | 第27-28页 |
| 2.2.3 细胞培养 | 第28-29页 |
| 2.2.4 单链抗体文库的构建 | 第29-34页 |
| 2.2.5 体外转录和翻译 | 第34-35页 |
| 2.2.6 亲和筛选 | 第35-36页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第36-45页 |
| 2.3.1 FZD的还原及其鉴定 | 第36-38页 |
| 2.3.2 偶联产物的检测 | 第38-41页 |
| 2.3.3 杂交瘤细胞总RNA的提取 | 第41-42页 |
| 2.3.4 抗体可变区VH和VL的扩增 | 第42页 |
| 2.3.5 单链抗体基因VH-linker-VL的扩增结果 | 第42-43页 |
| 2.3.6 单链抗体文库的验证 | 第43-44页 |
| 2.3.7 核糖体展示筛选单链抗体库 | 第44-45页 |
| 2.4 本章小结 | 第45-47页 |
| 第三章 单链抗体的原核表达及亲和力分析 | 第47-65页 |
| 3.1 实验材料 | 第47-48页 |
| 3.1.1 实验试剂 | 第47页 |
| 3.1.2 主要溶液和试剂配制 | 第47-48页 |
| 3.1.3 仪器设备 | 第48页 |
| 3.1.4 菌株、质粒 | 第48页 |
| 3.2 实验方法 | 第48-54页 |
| 3.2.1 单链抗体重组质粒的构建 | 第48-50页 |
| 3.2.2 单链抗体的原核可溶性表达 | 第50-51页 |
| 3.2.3 ELISA法筛选单链抗体 | 第51页 |
| 3.2.4 单链抗体表达条件的优化及纯化 | 第51-52页 |
| 3.2.5 SDS-PAGE检测可溶性表达产物 | 第52-53页 |
| 3.2.6 可溶性ScFv抗体的亲和力分析 | 第53-54页 |
| 3.2.7 ScFv抗体的交叉反应性分析 | 第54页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第54-64页 |
| 3.3.1 单链抗体ScFv片段的扩增结果 | 第54-55页 |
| 3.3.2 重组质粒pET-28a(+)-ScFv的构建和验证 | 第55-57页 |
| 3.3.3 ELISA法筛选阳性克隆子 | 第57-59页 |
| 3.3.4 单链抗体表达条件的优化 | 第59-61页 |
| 3.3.5 可溶性表达产物的诱导表达及纯化 | 第61页 |
| 3.3.6 可溶性ScFv抗体的亲和力分析 | 第61-63页 |
| 3.3.7 ScFv抗体的交叉反应性分析 | 第63-64页 |
| 3.4 本章小结 | 第64-65页 |
| 第四章 呋喃唑酮酶联免疫检测方法的建立 | 第65-72页 |
| 4.1 材料与仪器 | 第65页 |
| 4.1.1 材料 | 第65页 |
| 4.1.2 仪器 | 第65页 |
| 4.2 实验方法 | 第65-67页 |
| 4.2.1 最佳包被抗原及单链抗体工作浓度的确定 | 第65-66页 |
| 4.2.2 一抗最佳反应时间的确定 | 第66页 |
| 4.2.3 二抗最佳反应时间的确定 | 第66页 |
| 4.2.4 TMB显色时间的确定 | 第66页 |
| 4.2.5 检测方法的最低检测限分析 | 第66页 |
| 4.2.6 间接竞争ELISA检测方法的精密度测试 | 第66-67页 |
| 4.2.7 样品加标回收率 | 第67页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第67-71页 |
| 4.3.1 包被抗原及单链抗体工作浓度的确定 | 第67-68页 |
| 4.3.2 一抗最佳反应时间的确立 | 第68页 |
| 4.3.3 二抗最佳反应时间的确立 | 第68-69页 |
| 4.3.4 TMB显色时间的确立 | 第69-70页 |
| 4.3.5 检测方法的最低检测限分析 | 第70页 |
| 4.3.6 间接竞争ELISA检测方法的精密度测试 | 第70页 |
| 4.3.7 样品加标回收率的测定 | 第70-71页 |
| 4.4 本章小结 | 第71-72页 |
| 结论与展望 | 第72-74页 |
| 结论 | 第72-73页 |
| 建议与展望 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-81页 |
| 附录 | 第81-83页 |
| 附录一: 抗呋喃唑酮单链抗体基因全序列 | 第81-82页 |
| 附录二: PET-28A(+)质粒图谱 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 个人简历 | 第84页 |
| 在读期间已发表和录用的论文 | 第84页 |
