| 摘要 | 第6-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 缩略表 | 第14-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-22页 |
| 1.1 巴德-毕氏综合征概述 | 第16-18页 |
| 1.1.1 巴德-毕氏综合征的特征 | 第16-17页 |
| 1.1.1.1 视网膜色素变性 | 第16页 |
| 1.1.1.2 肥胖和肾脏功能异常 | 第16-17页 |
| 1.1.2 巴德-毕氏综合征相关致病基因及遗传模型 | 第17-18页 |
| 1.2 驱动蛋白概述 | 第18-19页 |
| 1.2.1 驱动蛋白结构和功能 | 第18-19页 |
| 1.2.2 KIF2A功能研究进展 | 第19页 |
| 1.3 前期工作及研究目的 | 第19-22页 |
| 第二章 KIF2A重组质粒的验证 | 第22-29页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 实验路线 | 第22页 |
| 2.3 实验材料和仪器 | 第22-24页 |
| 2.3.1 实验材料 | 第22-23页 |
| 2.3.2 主要实验试剂 | 第23页 |
| 2.3.3 主要实验仪器 | 第23-24页 |
| 2.4 实验方法 | 第24-26页 |
| 2.4.1 pcDNA4.0 to myc his A-KIF2A质粒的转化 | 第24页 |
| 2.4.2 KIF2A质粒小量提取及酶切 | 第24-26页 |
| 2.4.3 KIF2A质粒大量提取及酶切、测序 | 第26页 |
| 2.5 实验结果 | 第26-27页 |
| 2.5.1 pcDNA4.0 to myc hisA KIF2A质粒小提和大提酶切验证 | 第26-27页 |
| 2.5.2 pcDNA4.0 to myc hisA KIF2A质粒测序验证 | 第27页 |
| 2.6 小结 | 第27页 |
| 2.7 讨论 | 第27-29页 |
| 第三章 KIF2A基因表达模型的构建及验证 | 第29-52页 |
| 3.1 前言 | 第29页 |
| 3.2 实验路线 | 第29-30页 |
| 3.2.1 KIF2A基因过表达细胞模型的构建路线 | 第29-30页 |
| 3.2.2 KIF2A基因敲除细胞模型的构建路线 | 第30页 |
| 3.3 实验材料和仪器 | 第30-33页 |
| 3.3.1 实验材料 | 第30-31页 |
| 3.3.2 主要实验试剂 | 第31-32页 |
| 3.3.3 主要实验仪器及耗材 | 第32-33页 |
| 3.4 实验方法 | 第33-42页 |
| 3.4.1 293T、3T3-L1细胞培养 | 第33-34页 |
| 3.4.2 293T、3T3-L1细胞转染 | 第34-37页 |
| 3.4.2.1 KIF2A基因过表达模型的构建及验证 | 第34-35页 |
| 3.4.2.2 KIF2A基因敲除细胞模型的构建及验证 | 第35-37页 |
| 3.4.3 KIF2A引物、KIF2A siRNA和sgRNA序列 | 第37-38页 |
| 3.4.4 RNA提取及逆转录 | 第38-39页 |
| 3.4.5 荧光定量PCR | 第39页 |
| 3.4.6 总蛋白的提取及定量 | 第39-40页 |
| 3.4.7 Western blotting检测蛋白质表达 | 第40-42页 |
| 3.4.8 数据分析 | 第42页 |
| 3.5 实验结果 | 第42-49页 |
| 3.5.1 KIF2A基因过表达细胞模型的验证 | 第42-47页 |
| 3.5.1.1 293T、3T3-L1细胞的培养 | 第43页 |
| 3.5.1.2 KIF2A过表达细胞模型mRNA水平检测 | 第43-46页 |
| 3.5.1.3 KIF2A过表达细胞模型蛋白水平检测 | 第46-47页 |
| 3.5.2 KIF2A基因敲除细胞模型的验证 | 第47-49页 |
| 3.5.2.1 Crispr-Cas9重组质粒构建结果 | 第47-48页 |
| 3.5.2.2 RNA干扰细胞模型的构建结果 | 第48-49页 |
| 3.6 小结 | 第49-50页 |
| 3.7 讨论 | 第50-52页 |
| 3.7.1 KIF2A基因过表达细胞模型验证讨论 | 第50-51页 |
| 3.7.2 KIF2A基因敲除细胞模型验证讨论 | 第51-52页 |
| 第四章 KIF2A基因与BBS家系表达差异基因相关性 | 第52-61页 |
| 4.1 前言 | 第52页 |
| 4.2 实验路线 | 第52页 |
| 4.3 实验材料和仪器 | 第52-53页 |
| 4.3.1 实验材料 | 第52页 |
| 4.3.2 主要实验试剂 | 第52页 |
| 4.3.3 主要实验仪器 | 第52-53页 |
| 4.4 实验方法 | 第53-54页 |
| 4.4.1 293T、3T3-L1细胞的培养 | 第53页 |
| 4.4.2 293T、3T3-L1细胞的转染 | 第53页 |
| 4.4.3 RNA提取及逆转录 | 第53页 |
| 4.4.4 荧光定量 | 第53-54页 |
| 4.4.5 数据分析 | 第54页 |
| 4.5 实验结果 | 第54-58页 |
| 4.5.1 荧光定量PCR各基因扩增情况 | 第54-57页 |
| 4.5.2 荧光定量PCR各基因表达变化情况 | 第57-58页 |
| 4.6 小结 | 第58-59页 |
| 4.7 讨论 | 第59-61页 |
| 第五章 KIF2A基因对细胞增殖的影响 | 第61-65页 |
| 5.1 引言 | 第61页 |
| 5.2 实验路线 | 第61页 |
| 5.3 实验材料和仪器 | 第61-62页 |
| 5.3.1 实验材料 | 第61-62页 |
| 5.3.2 主要实验试剂 | 第62页 |
| 5.3.3 主要实验仪器 | 第62页 |
| 5.4 实验方法 | 第62-63页 |
| 5.4.1 293T、3T3-L1细胞的培养 | 第62页 |
| 5.4.2 293T、3T3-L1细胞的转染 | 第62页 |
| 5.4.3 RNA提取及逆转录 | 第62页 |
| 5.4.4 荧光定量PCR | 第62页 |
| 5.4.5 MTS检测 | 第62-63页 |
| 5.4.6 数据统计分析 | 第63页 |
| 5.5 实验结果 | 第63-64页 |
| 5.6 小结和讨论 | 第64-65页 |
| 第六章 苗族家系BBS致病基因的筛查 | 第65-72页 |
| 6.1 研究背景 | 第65页 |
| 6.2 实验路线 | 第65-66页 |
| 6.3 实验材料和仪器 | 第66-67页 |
| 6.3.1 实验材料 | 第66页 |
| 6.3.2 主要实验试剂 | 第66页 |
| 6.3.3 主要实验仪器 | 第66-67页 |
| 6.4 实验方法 | 第67-68页 |
| 6.4.1 全血DNA提取 | 第67-68页 |
| 6.4.2 PCR扩增 | 第68页 |
| 6.5 实验结果 | 第68-70页 |
| 6.5.1 全血DNA普通PCR | 第69页 |
| 6.5.2 BBS致病家系筛查结果 | 第69-70页 |
| 6.6 小结 | 第70页 |
| 6.7 讨论 | 第70-72页 |
| 结论 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-80页 |
| 附录A 试剂配制 | 第80-82页 |
| 附录B 发表论文 | 第82-92页 |
| 附录C 作者简介 | 第92页 |
