| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-22页 |
| 1.1 食源性致病菌及外膜蛋白的概述 | 第10-14页 |
| 1.1.1 食源性致病菌的污染现状及危害 | 第10页 |
| 1.1.2 三种食源性致病菌简介 | 第10-12页 |
| 1.1.3 三种食源性致病菌外膜蛋白的概述 | 第12-14页 |
| 1.2 免疫磁珠分离技术 | 第14-17页 |
| 1.2.1 免疫磁珠的富集作用原理及结构 | 第14-15页 |
| 1.2.2 免疫磁珠分离技术的优点 | 第15-16页 |
| 1.2.3 免疫磁珠分离技术的应用 | 第16-17页 |
| 1.3 食源性沙门菌检测技术的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.3.1 传统培养检测 | 第17页 |
| 1.3.2 免疫学检测 | 第17-18页 |
| 1.3.3 分子生物学检测 | 第18-19页 |
| 1.4 实时荧光定量PCR（Quantitative Real-time PCR，qPCR）技术 | 第19-20页 |
| 1.4.1 qPCR技术扩增原理 | 第19-20页 |
| 1.4.2 qPCR技术特点 | 第20页 |
| 1.5 本实验研究目的及内容 | 第20-22页 |
| 第二章 三种食源性致病菌外膜蛋白的表达纯化 | 第22-41页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 材料 | 第22-24页 |
| 2.2.1 菌株及载体 | 第22页 |
| 2.2.2 琼脂糖凝胶电泳、细菌基因组提取及碱裂法质粒小提相关试剂 | 第22-23页 |
| 2.2.3 克隆、转化及酶切鉴定相关试剂 | 第23页 |
| 2.2.4 蛋白表达及包涵体纯化相关试剂 | 第23-24页 |
| 2.3 方法 | 第24-31页 |
| 2.3.1 菌株的培养及细菌基因组的提取 | 第24页 |
| 2.3.2 PCR扩增pagC, ail, cfrA基因序列 | 第24-26页 |
| 2.3.3 克隆载体的构建及鉴定 | 第26-27页 |
| 2.3.4 原核重组表达载体的构建及鉴定 | 第27-28页 |
| 2.3.5 重组外膜蛋白的诱导和表达 | 第28-30页 |
| 2.3.6 包涵体的纯化 | 第30-31页 |
| 2.4 结果与分析 | 第31-38页 |
| 2.4.1 外膜蛋白基因的PCR扩增结果 | 第31-34页 |
| 2.4.2 外膜蛋白基因的克隆与鉴定 | 第34-35页 |
| 2.4.3 原核重组表达载体的鉴定 | 第35-36页 |
| 2.4.4 三种重组外膜蛋白的表达结果 | 第36-37页 |
| 2.4.5 三种重组外膜蛋白的纯化结果 | 第37-38页 |
| 2.5 讨论 | 第38-40页 |
| 2.5.1 关于扩增基因的选择 | 第38-39页 |
| 2.5.2 关于克隆与表达载体的选择 | 第39页 |
| 2.5.3 关于包涵体蛋白纯化 | 第39-40页 |
| 2.6 小结 | 第40-41页 |
| 第三章 沙门菌免疫磁珠的制备及条件优化 | 第41-57页 |
| 3.1 引言 | 第41页 |
| 3.2 材料 | 第41-43页 |
| 3.2.1 菌种及培养基 | 第41页 |
| 3.2.2 主要溶液及其配制 | 第41-43页 |
| 3.3 方法 | 第43-48页 |
| 3.3.1 PagC抗血清的制备 | 第43页 |
| 3.3.2 多克隆抗体的纯化及定量 | 第43-44页 |
| 3.3.3 PagC抗血清及纯化后抗体效价的测定 | 第44-45页 |
| 3.3.4 重组PagC蛋白的免疫印迹分析（Western-blot） | 第45页 |
| 3.3.5 免疫磁珠的制备 | 第45-46页 |
| 3.3.6 免疫磁珠的参数优化 | 第46页 |
| 3.3.7 免疫磁珠进行沙门菌富集能力的确定 | 第46-47页 |
| 3.3.8 免疫磁珠进行沙门菌富集效果的特异性评价 | 第47-48页 |
| 3.3.9 扫描电镜观察免疫磁珠与沙门菌复合物 | 第48页 |
| 3.4 结果与分析 | 第48-55页 |
| 3.4.1 重组PagC蛋白抗血清及纯化后抗体效价的测定 | 第48-49页 |
| 3.4.2 重组PagC蛋白免疫印迹分析（Western-blot）结果 | 第49-50页 |
| 3.4.3 免疫磁珠的制备及优化 | 第50-51页 |
| 3.4.4 免疫磁珠捕获能力的确定 | 第51-53页 |
| 3.4.5 免疫磁珠富集沙门菌的特异性评价 | 第53-54页 |
| 3.4.6 扫描电镜观察免疫磁珠-沙门菌复合物 | 第54-55页 |
| 3.5 讨论 | 第55-56页 |
| 3.5.1 免疫磁珠的制备及优化 | 第55-56页 |
| 3.5.2 免疫磁珠捕获沙门菌的能力及特异性评价 | 第56页 |
| 3.6 小结 | 第56-57页 |
| 第四章 IMBs-qPCR检测食品中沙门菌方法的建立 | 第57-68页 |
| 4.1 引言 | 第57页 |
| 4.2 材料 | 第57-58页 |
| 4.2.1 样品前处理相关材料 | 第57页 |
| 4.2.2 荧光定量PCR相关试剂 | 第57-58页 |
| 4.3 方法 | 第58-60页 |
| 4.3.1 沙门菌pagC基因荧光定量PCR检测引物的设计 | 第58页 |
| 4.3.2 细菌DNA的快速提取 | 第58页 |
| 4.3.3 荧光定量PCR标准曲线的建立及灵敏度的确定 | 第58-59页 |
| 4.3.4 荧光定量PCR方法的重复性检测 | 第59页 |
| 4.3.5 pagC基因荧光定量PCR检测干扰实验 | 第59页 |
| 4.3.6 食品样品的免疫磁珠富集及荧光定量PCR检测 | 第59-60页 |
| 4.4 结果与分析 | 第60-65页 |
| 4.4.1 荧光定量PCR标准曲线的建立及灵敏度的确定 | 第60-61页 |
| 4.4.2 荧光定量PCR检测沙门菌的重复性分析 | 第61-62页 |
| 4.4.3 荧光定量PCR检测沙门菌的干扰性实验 | 第62-63页 |
| 4.4.4 IMBs-荧光定量PCR联用方法检测食品中的沙门菌 | 第63-65页 |
| 4.5 讨论 | 第65-67页 |
| 4.5.1 荧光定量PCR检测沙门菌方法的建立 | 第65-66页 |
| 4.5.2 IMBs-荧光定量PCR联用方法检测食品中的沙门菌 | 第66-67页 |
| 4.6 小结 | 第67-68页 |
| 第五章 结论 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-79页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第79-80页 |
| 附录 | 第80-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
