| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第一章 绪论 | 第9-16页 |
| 1.1 巴斯德毕赤酵母表达系统简介 | 第9-10页 |
| 1.1.1 巴斯德毕赤酵母表达系统的优点 | 第9页 |
| 1.1.2 巴斯德毕赤酵母的基因操作 | 第9-10页 |
| 1.1.3 影响外源基因高效表达的因素 | 第10页 |
| 1.2 β-葡聚糖酶研究进展 | 第10-13页 |
| 1.2.1 β-葡聚糖的结构及性质 | 第10-11页 |
| 1.2.2 β-葡聚糖酶的分类来源及酶学性质 | 第11-12页 |
| 1.2.3 β-葡聚糖酶的国内外研究现状 | 第12页 |
| 1.2.4 β-葡聚糖酶基因的外源表达 | 第12-13页 |
| 1.3 β-葡聚糖酶的应用 | 第13-14页 |
| 1.3.1 β-葡聚糖酶在啤酒酿造中的应用 | 第13页 |
| 1.3.2 β-葡聚糖酶在饲料中的应用 | 第13-14页 |
| 1.3.3 β-葡聚糖酶在制糖及生物防治方面中的应用 | 第14页 |
| 1.4 立题意义与研究内容 | 第14-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-24页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-18页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第16页 |
| 2.1.2 酶和试剂 | 第16页 |
| 2.1.3 主要培养基 | 第16页 |
| 2.1.4 引物 | 第16-17页 |
| 2.1.5 实验仪器 | 第17-18页 |
| 2.2 实验方法 | 第18-24页 |
| 2.2.1 黑曲霉CICIMF0510总RNA的提取及反转录 | 第18-19页 |
| 2.2.2 目的基因的扩增 | 第19页 |
| 2.2.3 重组表达载体的构建 | 第19-20页 |
| 2.2.4 毕赤酵母的转化及筛选 | 第20页 |
| 2.2.5 重组菌的诱导表达 | 第20页 |
| 2.2.6 毕赤酵母URA3基因的敲除 | 第20-21页 |
| 2.2.7 毕赤酵母TRP1基因的敲除 | 第21页 |
| 2.2.8 重组酶的分离纯化 | 第21页 |
| 2.2.9 重组酶的酶活测定 | 第21页 |
| 2.2.10 重组酶的蛋白浓度测定 | 第21-22页 |
| 2.2.11 重组酶的酶学性质分析 | 第22页 |
| 2.2.12 重组菌摇瓶条件发酵优化 | 第22-23页 |
| 2.2.13 重组菌5L发酵罐条件优化 | 第23-24页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第24-49页 |
| 3.1 黑曲霉葡聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达及酶学性质分析 | 第24-35页 |
| 3.1.1 葡聚糖酶基因的克隆 | 第24-25页 |
| 3.1.2 黑曲霉耐热型葡聚糖酶基因在毕赤酵母中的表达 | 第25-26页 |
| 3.1.3 葡聚糖酶基因的密码子优化与重组酶的纯化 | 第26-28页 |
| 3.1.4 重组葡聚糖酶的酶学性质分析 | 第28-35页 |
| 3.2 巴斯德毕赤酵母尿嘧啶及色氨酸营养缺陷型菌株的获得 | 第35-41页 |
| 3.2.1 巴斯德毕赤酵母URA3基因删除盒的构建 | 第36-37页 |
| 3.2.2 巴斯德毕赤酵母URA3基因的敲除及鉴定 | 第37-39页 |
| 3.2.3 巴斯德毕赤酵母TRP1基因删除盒的构建 | 第39-40页 |
| 3.2.4 巴斯德毕赤酵母TRP1基因的敲除及鉴定 | 第40-41页 |
| 3.3 提高葡聚糖酶基因拷贝数筛选高表达菌株 | 第41-43页 |
| 3.3.1 TRP1基因作为筛选标记的表达载体的构建及转化 | 第41-42页 |
| 3.3.2 URA3基因作为筛选标记的表达载体的构建及转化 | 第42-43页 |
| 3.4 重组菌P.pastorisGS115/pPIC9K-eglA6bHB133S6发酵优化 | 第43-49页 |
| 3.4.1 P.pastorisGS115/pPIC9K-eglA6bHB133S6摇瓶条件优化 | 第43-46页 |
| 3.4.2 P.pastorisGS115/pPIC9K-eglA6bHB133S6的5L发酵罐条件优化 | 第46-49页 |
| 主要结论与展望 | 第49-51页 |
| 主要结论 | 第49-50页 |
| 展望 | 第50-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第57页 |
