| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-16页 |
| 1.1 谷氨酰胺转胺酶的概述 | 第8-11页 |
| 1.1.1 TGase的来源、催化特性及活化原理 | 第8-9页 |
| 1.1.2 TGase的结构与功能 | 第9-10页 |
| 1.1.3 TGase的应用 | 第10-11页 |
| 1.2 酶热稳定性的分子改造进展 | 第11-13页 |
| 1.2.1 理性设计 | 第11-12页 |
| 1.2.2 定向进化 | 第12-13页 |
| 1.3 酶稳定剂的研究进展 | 第13-14页 |
| 1.3.1 小分子热休克蛋白的简介 | 第13页 |
| 1.3.2 其他稳定剂的研究现状 | 第13-14页 |
| 1.4 立题依据及研究意义 | 第14-15页 |
| 1.5 本论文主要研究内容 | 第15-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-26页 |
| 2.1 材料 | 第16-18页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第16页 |
| 2.1.2 培养基 | 第16页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第16页 |
| 2.1.4 主要溶液 | 第16-17页 |
| 2.1.5 主要仪器设备 | 第17-18页 |
| 2.2 方法 | 第18-26页 |
| 2.2.1 基因工程相关操作 | 第18-19页 |
| 2.2.2 TGase基因突变库的构建 | 第19-20页 |
| 2.2.3 sHSPsIbpA和IpbB的克隆及表达 | 第20-21页 |
| 2.2.4 感受态大肠杆菌的制备和转化 | 第21-22页 |
| 2.2.5 菌体生长测定 | 第22页 |
| 2.2.6 培养方法 | 第22页 |
| 2.2.7 高通量筛选方法 | 第22-23页 |
| 2.2.8 蛋白的纯化方法 | 第23页 |
| 2.2.9 蛋白浓度的测定 | 第23页 |
| 2.2.10 SDS-PAGE蛋白电泳 | 第23页 |
| 2.2.11 TGase样品的制备 | 第23-24页 |
| 2.2.12 pro-TGase的活化与酶活力的测定 | 第24页 |
| 2.2.13 TGase酶学性质研究 | 第24-25页 |
| 2.2.14 软件模拟 | 第25页 |
| 2.2.15 电镜检测 | 第25-26页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第26-51页 |
| 3.1 随机突变提高谷氨酰胺转胺酶热稳定性 | 第26-34页 |
| 3.1.1 突变体的构建与表达 | 第26页 |
| 3.1.2 突变体的热稳定性初筛与复筛 | 第26-30页 |
| 3.1.3 突变体的纯化与酶学性质分析 | 第30-31页 |
| 3.1.4 突变体的热稳定性提高机制解析 | 第31-34页 |
| 3.2 小分子热休克蛋白对谷氨酰胺转胺酶热稳定性的影响 | 第34-43页 |
| 3.2.1 sHSPs的选择 | 第34页 |
| 3.2.2 pET-22b(+)/IbpA和pET-22b(+)/IbpB的构建与表达 | 第34-35页 |
| 3.2.3 sHSPs纯化与对谷氨酰胺转胺酶热稳定性的影响 | 第35-38页 |
| 3.2.4 扫描电镜分析sHSPs与TGase的相互作用 | 第38-40页 |
| 3.2.5 融合蛋白的构建与表达 | 第40-42页 |
| 3.2.6 融合蛋白的纯化与酶学性质分析 | 第42-43页 |
| 3.3 谷氨酰胺转胺酶热稳定剂的筛选与优化 | 第43-51页 |
| 3.3.1 盐类对TGase热稳定性的影响 | 第43-44页 |
| 3.3.2 醇类对TGase热稳定性的影响 | 第44-45页 |
| 3.3.3 糖类对TGase热稳定性的影响 | 第45-46页 |
| 3.3.4 氨基酸对TGase热稳定性的影响 | 第46-47页 |
| 3.3.5 蛋白质对TGase热稳定性的影响 | 第47-48页 |
| 3.3.6 复合稳定剂对TGase热稳定性的影响 | 第48-51页 |
| 主要结论与展望 | 第51-53页 |
| 主要结论 | 第51-52页 |
| 展望 | 第52-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第61页 |
