| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-22页 |
| 1.1 引言 | 第11-12页 |
| 1.1.1 赤藓糖醇 | 第11-12页 |
| 1.1.2 核糖醇 | 第12页 |
| 1.2 多元醇的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.2.1 耐高渗酵母产多元醇的研究进展 | 第13页 |
| 1.3 外源基因转化酵母的方法 | 第13-16页 |
| 1.3.1 主要研究进展 | 第13-14页 |
| 1.3.2 外源基因在酵母菌中转化存在的问题 | 第14-16页 |
| 1.4 多元醇发酵生产过程调控 | 第16-18页 |
| 1.4.1 多元醇生产的发酵调控 | 第16页 |
| 1.4.2 多元醇生产的分子调控 | 第16-18页 |
| 1.5 高渗透压甘油途径HOG1 | 第18-19页 |
| 1.6 基因敲除技术 | 第19-20页 |
| 1.6.1 传统方法 | 第19-20页 |
| 1.6.1.1 利用基因同源重组敲除靶基因 | 第19-20页 |
| 1.6.1.2 利用随机插入突变敲除靶基因 | 第20页 |
| 1.6.2 新兴方法 | 第20页 |
| 1.7 本文研究内容及意义 | 第20-22页 |
| 第二章 球头三型孢菌化学转化法的建立 | 第22-36页 |
| 2.1 引言 | 第22页 |
| 2.2 实验材料 | 第22-23页 |
| 2.2.1 菌种及培养基 | 第22-23页 |
| 2.2.2 试剂 | 第23页 |
| 2.2.3 主要设备与仪器 | 第23页 |
| 2.3 实验方法 | 第23-26页 |
| 2.3.1 溶液配制 | 第23-24页 |
| 2.3.2 G418浓度选择 | 第24页 |
| 2.3.3 单因素实验 | 第24-26页 |
| 2.3.3.1 实验菌的传代培养及种子液的制备 | 第25页 |
| 2.3.3.2 制备感受态细胞并转化 | 第25页 |
| 2.3.3.3 菌落PCR | 第25-26页 |
| 2.3.4 响应面分析法优化球头三型孢菌转化条件 | 第26页 |
| 2.4 结果讨论 | 第26-35页 |
| 2.4.1 G418浓度对球头三型孢菌的影响 | 第26-27页 |
| 2.4.2 阳性克隆子的菌落PCR验证 | 第27页 |
| 2.4.3 Zymolyase-100T浓度对转化效率的影响 | 第27-28页 |
| 2.4.4 Zymolyase-100T反应时间对转化效率的影响 | 第28-29页 |
| 2.4.5 转化液对酵母转化效率的影响 | 第29-31页 |
| 2.4.6 响应面分析 | 第31-35页 |
| 2.5 本章小结 | 第35-36页 |
| 第三章 HOG1缺失型球头三型孢菌的构建 | 第36-51页 |
| 3.1 引言 | 第36页 |
| 3.2 实验材料 | 第36-40页 |
| 3.2.1 菌种及质粒 | 第36页 |
| 3.2.2 试剂 | 第36-38页 |
| 3.2.3 主要仪器 | 第38-39页 |
| 3.2.4 配制试剂 | 第39-40页 |
| 3.2.5 培养基配制方法 | 第40页 |
| 3.3 实验方法 | 第40-45页 |
| 3.3.1 球头三型胞菌基因敲除原理 | 第40-42页 |
| 3.3.2 保守序列分析 | 第42页 |
| 3.3.3 球头三型孢菌基因组DNA提取 | 第42页 |
| 3.3.4 质粒p UG6与质粒p SH65的准备 | 第42页 |
| 3.3.5 球头三型孢菌HOG1基因的获取 | 第42页 |
| 3.3.6 敲除组件的准备 | 第42-43页 |
| 3.3.7 敲除球头三型胞菌HOG1基因 | 第43-45页 |
| 3.4 实验结果 | 第45-49页 |
| 3.4.1 球头三型孢菌基因组DNA提取 | 第45页 |
| 3.4.2 球头三型孢菌HOG1基因 | 第45-46页 |
| 3.4.3 敲除组件 | 第46-47页 |
| 3.4.4 球头三型孢菌HOG1基因敲除 | 第47-49页 |
| 3.5 本章小结 | 第49-51页 |
| 第四章T. oedocephalis及其HOG1缺失型工程菌的发酵研究 | 第51-67页 |
| 4.1 引言 | 第51页 |
| 4.2 实验材料 | 第51-53页 |
| 4.2.1 菌种 | 第51页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第51-52页 |
| 4.2.3 仪器 | 第52页 |
| 4.2.4 培养基配方 | 第52-53页 |
| 4.3 检测方法 | 第53页 |
| 4.4 实验方法 | 第53-54页 |
| 4.4.1 工程菌生长曲线的绘制 | 第53页 |
| 4.4.2 柠檬酸对T.oedocephalis产多元醇的影响 | 第53-54页 |
| 4.4.3 单因素实验研究工程菌的发酵 | 第54页 |
| 4.4.3.1 磷酸甘油脱氢酶浓度分析 | 第54页 |
| 4.3.3.2 单因素实验 | 第54页 |
| 4.4.4 原始菌与工程菌产多元醇发酵对比 | 第54页 |
| 4.5 结果与讨论 | 第54-65页 |
| 4.5.1 生长曲线的绘制 | 第54-55页 |
| 4.5.2 柠檬酸对T.oedocephalis产多元醇的影响 | 第55-57页 |
| 4.5.3 单因素实验研究工程菌的发酵 | 第57-64页 |
| 4.5.3.1 葡萄糖浓度对原始菌与工程菌产多元醇的影响 | 第57-58页 |
| 4.5.3.2 氯化钠浓度对原始菌与工程菌产多元醇的影响 | 第58-59页 |
| 4.5.3.3 溶氧对原始菌与工程菌产多元醇的影响 | 第59-60页 |
| 4.5.3.4 酵母粉浓度对原始菌与工程菌产多元醇的影响 | 第60-61页 |
| 4.5.3.5 酸二氢钾浓度对原始菌与工程菌产多元醇的影响 | 第61-62页 |
| 4.5.3.6 硫酸镁浓度对原始菌与工程菌产多元醇的影响 | 第62-64页 |
| 4.5.4 原始菌与工程菌产多元醇发酵对比 | 第64-65页 |
| 4.6 本章小结 | 第65-67页 |
| 第五章 结论与展望 | 第67-69页 |
| 5.1 主要结论 | 第67页 |
| 5.2 研究展望 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 附录1 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 作者简介 | 第77-78页 |
