| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略词表 | 第11-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-33页 |
| 1.1 引言 | 第17页 |
| 1.2 漆酶概述 | 第17-26页 |
| 1.2.1 漆酶来源 | 第17-19页 |
| 1.2.2 漆酶的结构和反应机理 | 第19-20页 |
| 1.2.2.1 漆酶的结构 | 第19-20页 |
| 1.2.2.2 漆酶的反应机理 | 第20页 |
| 1.2.3 漆酶的应用 | 第20-22页 |
| 1.2.3.1 染料脱色 | 第20-21页 |
| 1.2.3.2 农药降解 | 第21页 |
| 1.2.3.3 木质素降解和纸浆漂白 | 第21-22页 |
| 1.2.3.4 食品加工 | 第22页 |
| 1.2.3.5 制药行业 | 第22页 |
| 1.2.4 漆酶的介体 | 第22-24页 |
| 1.2.5 漆酶的异源表达 | 第24-26页 |
| 1.2.5.1 细菌表达系统 | 第25页 |
| 1.2.5.2 酵母表达系统 | 第25页 |
| 1.2.5.3 丝状真菌表达系统 | 第25-26页 |
| 1.2.5.4 植物表达系统 | 第26页 |
| 1.3 里氏木霉表达系统 | 第26-31页 |
| 1.3.1 里氏木霉生产的酶 | 第26-27页 |
| 1.3.2 里氏木霉启动子Pcbh1 | 第27页 |
| 1.3.3 基因转化方法 | 第27-28页 |
| 1.3.3.1 原生质体法 | 第28页 |
| 1.3.3.2 基因枪法 | 第28页 |
| 1.3.3.3 农杆菌介导法 | 第28页 |
| 1.3.4 里氏木霉转化系统常用的筛选标记 | 第28-29页 |
| 1.3.5 蛋白质糖基化 | 第29-30页 |
| 1.3.6 里氏木霉对生物质原料的利用 | 第30-31页 |
| 1.4 本课题的研究思路和拟研究内容 | 第31-33页 |
| 1.4.1 本文主要研究内容 | 第31-33页 |
| 第二章 外源漆酶基因在里氏木霉中的克隆与表达 | 第33-52页 |
| 2.1 引言 | 第33页 |
| 2.2 材料与方法 | 第33-42页 |
| 2.2.1 菌株和质粒 | 第33页 |
| 2.2.2 试剂 | 第33-34页 |
| 2.2.2.1 柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液 | 第34页 |
| 2.2.2.2 ABTS溶液 | 第34页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第34-35页 |
| 2.2.4 培养基 | 第35-36页 |
| 2.2.4.1 大肠杆菌和农杆菌培养基 | 第35页 |
| 2.2.4.2 里氏木霉培养基 | 第35-36页 |
| 2.2.5 漆酶基因的优化 | 第36-37页 |
| 2.2.6 转化质粒的构建 | 第37-39页 |
| 2.2.7 质粒转入大肠杆菌 | 第39页 |
| 2.2.8 质粒转入里氏木霉 | 第39-40页 |
| 2.2.9 里氏木霉转化子的筛选 | 第40页 |
| 2.2.10 里氏木霉转化子的产酶实验 | 第40-41页 |
| 2.2.11 里氏木霉转化子基因组DNA的PCR检测 | 第41页 |
| 2.2.12 测定方法 | 第41-42页 |
| 2.2.12.1 漆酶活力的测定 | 第41页 |
| 2.2.12.2 不同因素对农杆菌介导转化效率的影响 | 第41-42页 |
| 2.2.12.3 发酵上清液的SDS-PAGE蛋白电泳检测 | 第42页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第42-50页 |
| 2.3.1 血红密孔菌漆酶基因的优化 | 第42页 |
| 2.3.2 重组质粒pCH-lac的验证 | 第42-43页 |
| 2.3.3 影响农杆菌介导转化效率因素的研究 | 第43-48页 |
| 2.3.3.1 共培养温度对转化效率的影响 | 第44页 |
| 2.3.3.2 培养基pH对转化效率的影响 | 第44-45页 |
| 2.3.3.3 AS浓度对转化效率的影响 | 第45-46页 |
| 2.3.3.4 里氏木霉孢子浓度对转化效率的影响 | 第46-47页 |
| 2.3.3.5 共培养时间对转化效率的影响 | 第47-48页 |
| 2.3.4 里氏木霉转化子的筛选 | 第48页 |
| 2.3.5 里氏木霉转化子基因组的PCR验证 | 第48页 |
| 2.3.6 转化子的产酶结果 | 第48-50页 |
| 2.3.7 酶液的SDS-PAGE蛋白电泳分析 | 第50页 |
| 2.4 本章小结 | 第50-52页 |
| 第三章 重组里氏木霉产漆酶及其酶学性质研究 | 第52-73页 |
| 3.1 引言 | 第52页 |
| 3.2 材料与方法 | 第52-57页 |
| 3.2.1 菌株 | 第52页 |
| 3.2.2 试剂 | 第52页 |
| 3.2.2.1 DNS溶液 | 第52页 |
| 3.2.3 实验仪器及设备 | 第52-53页 |
| 3.2.4 培养基 | 第53页 |
| 3.2.5 产酶实验 | 第53页 |
| 3.2.6 发酵培养基组分对重组里氏木霉ZJ09产漆酶的影响 | 第53-54页 |
| 3.2.6.1 碳源对产酶的影响 | 第54页 |
| 3.2.6.2 氮源种类对产酶的影响 | 第54页 |
| 3.2.6.3 铜离子浓度对产酶的影响 | 第54页 |
| 3.2.7 重组里氏木霉ZJ09液体发酵产漆酶的条件优化 | 第54页 |
| 3.2.8 分批补料发酵方法 | 第54-55页 |
| 3.2.9 重组里氏木霉ZJ09所产漆酶的酶学性质研究 | 第55-56页 |
| 3.2.9.1 温度对重组漆酶活性的影响 | 第55页 |
| 3.2.9.2 重组漆酶的热稳定性研究 | 第55页 |
| 3.2.9.3 pH对重组漆酶活性的影响 | 第55页 |
| 3.2.9.4 重组漆酶的pH稳定性研究 | 第55页 |
| 3.2.9.5 金属离子对重组漆酶活力的影响 | 第55-56页 |
| 3.2.9.6 有机溶剂对重组漆酶活力的影响 | 第56页 |
| 3.2.9.7 重组漆酶的动力学常数测定 | 第56页 |
| 3.2.10 测定方法 | 第56页 |
| 3.2.10.1 漆酶活力的测定 | 第56页 |
| 3.2.10.2 还原糖含量的测定 | 第56页 |
| 3.2.10.3 菌体生物量的测定 | 第56页 |
| 3.2.11 数据处理 | 第56-57页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第57-71页 |
| 3.3.1 发酵培养基组分对里氏木霉ZJ09产漆酶的影响 | 第57-61页 |
| 3.3.1.1 不同可溶性碳源对重组里氏木霉ZJ09产漆酶的影响 | 第57-58页 |
| 3.3.1.2 不同氮源对重组里氏木霉ZJ09产漆酶的影响 | 第58-60页 |
| 3.3.1.3 铜离子浓度对重组里氏木霉ZJ09产漆酶的影响 | 第60-61页 |
| 3.3.2 重组里氏木霉ZJ09摇瓶条件下液体发酵产漆酶的条件优化 | 第61-63页 |
| 3.3.2.1 发酵温度 | 第61-62页 |
| 3.3.2.2 发酵液初始pH | 第62页 |
| 3.3.2.3 接种量 | 第62-63页 |
| 3.3.3 重组里氏木霉ZJ09产漆酶的时间进程 | 第63-64页 |
| 3.3.4 补料培养的产酶进程 | 第64-65页 |
| 3.3.5 重组漆酶酶学性质的研究 | 第65-71页 |
| 3.3.5.1 温度对重组漆酶活力的影响 | 第65-66页 |
| 3.3.5.2 重组漆酶的热稳定性 | 第66-67页 |
| 3.3.5.3 pH对重组漆酶活力的影响 | 第67页 |
| 3.3.5.4 重组漆酶的pH稳定性 | 第67-68页 |
| 3.3.5.5 金属离子对重组漆酶活力的影响 | 第68-69页 |
| 3.3.5.6 有机溶剂对重组漆酶活力的影响 | 第69-70页 |
| 3.3.5.7 重组漆酶的动力学常数测定 | 第70-71页 |
| 3.4 本章小结 | 第71-73页 |
| 第四章 利用重组里氏木霉高效降解秸秆的研究 | 第73-89页 |
| 4.1 引言 | 第73-74页 |
| 4.2 材料与方法 | 第74-78页 |
| 4.2.1 菌株 | 第74页 |
| 4.2.2 试剂 | 第74页 |
| 4.2.2.1 葡萄糖标准溶液 | 第74页 |
| 4.2.2.2 中性洗涤液 | 第74页 |
| 4.2.2.3 蒽酮溶液 | 第74页 |
| 4.2.3 实验仪器及设备 | 第74-75页 |
| 4.2.4 甘蔗渣和稻草秸秆的氨水预处理 | 第75页 |
| 4.2.5 培养基 | 第75-76页 |
| 4.2.6 重组转化子ZJ09固态发酵实验 | 第76页 |
| 4.2.7 测定方法 | 第76-78页 |
| 4.2.7.1 粗酶液的制备 | 第76页 |
| 4.2.7.2 漆酶活力的测定 | 第76页 |
| 4.2.7.3 还原糖含量的测定 | 第76页 |
| 4.2.7.4 滤纸酶活力的测定 | 第76页 |
| 4.2.7.5 木聚糖酶活力的测定 | 第76-77页 |
| 4.2.7.6 稻草和甘蔗渣总失重及纤维素、半纤维素和木质素含量的测定 | 第77-78页 |
| 4.2.8 数据处理 | 第78页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第78-88页 |
| 4.3.1 重组里氏木霉以秸秆为主要原料的固态发酵研究 | 第78-88页 |
| 4.3.1.1 培养温度的影响 | 第78-79页 |
| 4.3.1.2 培养基初始pH的影响 | 第79-80页 |
| 4.3.1.3 基质含水量的影响 | 第80-81页 |
| 4.3.1.4 接种量的影响 | 第81-82页 |
| 4.3.1.5 氨水预处理的影响 | 第82-83页 |
| 4.3.1.6 麸皮的加入对于产酶的影响 | 第83-84页 |
| 4.3.1.7 原始里氏木霉ZU02和重组里氏木霉ZJ09的固态发酵产酶结果 | 第84-87页 |
| 4.3.1.8 原始里氏木霉和重组里氏木霉对原料的降解 | 第87-88页 |
| 4.4 本章小结 | 第88-89页 |
| 第五章 重组漆酶在环境污染物治理上的应用 | 第89-106页 |
| 5.1 引言 | 第89页 |
| 5.2 材料与方法 | 第89-93页 |
| 5.2.1 漆酶 | 第89页 |
| 5.2.2 试剂 | 第89-90页 |
| 5.2.2.1 染料母液 | 第90页 |
| 5.2.2.2 介体溶液 | 第90页 |
| 5.2.2.3 内分泌干扰物母液 | 第90页 |
| 5.2.3 实验仪器及设备 | 第90-91页 |
| 5.2.4 染料脱色实验 | 第91页 |
| 5.2.4.1 重组漆酶对弱酸性紫N-FBL的脱色实验 | 第91页 |
| 5.2.4.2 重组漆酶对活性艳蓝KN-R的脱色实验 | 第91页 |
| 5.2.4.3 重组漆酶对苋菜红的脱色实验 | 第91页 |
| 5.2.5 内分泌干扰物降解实验 | 第91-92页 |
| 5.2.5.1 双酚A降解实验 | 第92页 |
| 5.2.5.2 三氯生降解实验 | 第92页 |
| 5.2.6 测定方法 | 第92-93页 |
| 5.2.6.1 漆酶活力的测定 | 第92页 |
| 5.2.6.2 染料脱色率的测定 | 第92-93页 |
| 5.2.6.3 内分泌干扰物降解率的测定 | 第93页 |
| 5.2.7 数据处理 | 第93页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第93-105页 |
| 5.3.1 重组漆酶对弱酸性紫N-FBL的脱色 | 第93-98页 |
| 5.3.1.1 漆酶用量对弱酸性紫N-FBL脱色影响 | 第94页 |
| 5.3.1.2 pH对弱酸性紫N-FBL脱色反应的影响 | 第94-95页 |
| 5.3.1.3 温度对弱酸性紫N-FBL脱色反应的影响 | 第95-96页 |
| 5.3.1.4 金属离子及其浓度对弱酸性紫N-FBL脱色反应的影响 | 第96-97页 |
| 5.3.1.5 漆酶对弱酸性紫N-FBL脱色反应进程 | 第97-98页 |
| 5.3.2 重组漆酶对活性艳蓝KN-R的降解 | 第98-99页 |
| 5.3.3 重组漆酶对苋菜红的脱色 | 第99-102页 |
| 5.3.3.1 不同介体对苋菜红脱色的影响 | 第100页 |
| 5.3.3.2 丁香醛浓度对苋菜红脱色的影响 | 第100-101页 |
| 5.3.3.3 苋菜红脱色的时间进程 | 第101-102页 |
| 5.3.4 重组漆酶对双酚A的降解 | 第102-104页 |
| 5.3.4.1 不同介体对双酚A降解的影响 | 第102-103页 |
| 5.3.4.2 双酚A降解的时间进程 | 第103-104页 |
| 5.3.5 重组漆酶对三氯生的降解 | 第104-105页 |
| 5.4 本章小结 | 第105-106页 |
| 第六章 结论与展望 | 第106-109页 |
| 6.1 结论 | 第106-107页 |
| 6.2 展望 | 第107页 |
| 6.3 论文创新点 | 第107-109页 |
| 参考文献 | 第109-121页 |
| 作者简历 | 第121页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第121页 |
