| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 绪言 | 第10-22页 |
| 前言 | 第10页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的研究进展 | 第10-17页 |
| ·β-葡萄糖苷酶的性质研究 | 第10-13页 |
| ·β-葡萄糖苷酶基因的克隆与表达研究 | 第13-17页 |
| ·巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达系统 | 第17-20页 |
| ·巴斯德毕赤酵母特性 | 第17-18页 |
| ·表达体系简介 | 第18-19页 |
| ·蛋白在毕赤酵母中的表达 | 第19-20页 |
| ·应用前景 | 第20页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第20-21页 |
| ·研究内容与技术路线 | 第21-22页 |
| 第二章 黑曲霉β-葡萄糖苷酶基因的cDNA克隆 | 第22-38页 |
| 前言 | 第22页 |
| ·实验材料 | 第22-24页 |
| ·菌株和质粒 | 第22页 |
| ·工具酶及主要试剂 | 第22页 |
| ·主要实验仪器 | 第22-23页 |
| ·主要溶液和培养基 | 第23-24页 |
| ·实验方法 | 第24-30页 |
| ·黑曲霉的诱导培养 | 第24页 |
| ·黑曲霉总RNA的提取 | 第24-25页 |
| ·RT-PCR获取目的基因 | 第25-28页 |
| ·克隆载体的构建与转化 | 第28-30页 |
| ·基因测序分析 | 第30页 |
| ·结果与分析 | 第30-35页 |
| ·总RNA提取 | 第30页 |
| ·RT-PCR结果 | 第30-31页 |
| ·重组子筛选与检测 | 第31-32页 |
| ·基因序列测定与分析 | 第32-35页 |
| ·讨论 | 第35-38页 |
| ·样品的处理及RNA提取 | 第35-36页 |
| ·RT-PCR实验 | 第36页 |
| ·基因结构与功能分析 | 第36-38页 |
| 第三章 β-葡萄糖苷酶基因在毕赤酵母中表达 | 第38-58页 |
| 前言 | 第38页 |
| ·实验材料 | 第38-40页 |
| ·菌株和质粒 | 第38页 |
| ·工具酶 | 第38页 |
| ·主要实验仪器 | 第38-39页 |
| ·培养基和部分溶液配制 | 第39-40页 |
| ·实验方法 | 第40-48页 |
| ·重组载体pPICZ a-bgl的构建 | 第40-42页 |
| ·转化毕赤酵母 | 第42-43页 |
| ·重组酵母的验证 | 第43-45页 |
| ·表达产物的检测 | 第45-46页 |
| ·表达的β-葡萄糖苷酶酶活分析 | 第46-48页 |
| ·重组β-葡萄糖苷酶的酶学性质 | 第48页 |
| ·结果与分析 | 第48-54页 |
| ·重组表达载体的构建与验证 | 第48-49页 |
| ·酵母转化重组子的筛选 | 第49-51页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第51-52页 |
| ·酶活测定结果 | 第52-53页 |
| ·重组酵母β-葡萄糖苷酶性质 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-58页 |
| ·表达载体与宿主菌的选择 | 第54-55页 |
| ·关于转化酵母 | 第55页 |
| ·关于诱导表达 | 第55页 |
| ·影响酶活和蛋白质表达的因素讨论 | 第55-58页 |
| 第四章 结论与建议 | 第58-60页 |
| ·结论 | 第58页 |
| ·创新点 | 第58-59页 |
| ·建议 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 附录A:缩略词表 | 第66-68页 |
| 附录B pGM-T载体图谱 | 第68-69页 |
| 附录C pPICZ a表达载体图谱 | 第69-70页 |
| 附录D:bgl基因部分测序报告 | 第70-72页 |
| 附录E:bgl基因注册GenBank | 第72-74页 |
| 附录F:攻读硕士研究生期间的科研成果 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |