| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-20页 |
| 1 金黄色葡萄球菌肠毒素A | 第13-15页 |
| 1.1 金黄色葡萄球菌肠毒素A简介 | 第13页 |
| 1.2 金黄色葡萄球菌肠毒素A的检测方法 | 第13-15页 |
| 1.2.1 动物学试验 | 第13-14页 |
| 1.2.2 免疫学方法 | 第14页 |
| 1.2.3 PCR技术 | 第14页 |
| 1.2.4 生物传感器技术 | 第14-15页 |
| 1.2.5 超抗原技术 | 第15页 |
| 2 SELEX技术 | 第15-19页 |
| 2.1 SELEX技术原理 | 第15-17页 |
| 2.2 SELEX技术筛选的适配体优势 | 第17-18页 |
| 2.3 高效率SELEX技术的研究进展 | 第18页 |
| 2.4 SELEX技术的应用 | 第18-19页 |
| 3 研究目的与意义 | 第19-20页 |
| 第二章 SELEX的优化与改良 | 第20-43页 |
| 1 材料 | 第20-21页 |
| 1.1 主要仪器 | 第20页 |
| 1.2 主要试剂 | 第20-21页 |
| 2 方法 | 第21-29页 |
| 2.1 几种溶液的配制 | 第21-22页 |
| 2.2 文库的优化 | 第22-23页 |
| 2.2.1 随机ssDNA文库及引物的选择比较 | 第22页 |
| 2.2.2 随机ssDNA文库的质量鉴定 | 第22-23页 |
| 2.3 分离方法的优化 | 第23-25页 |
| 2.3.1 尿素变性PAGE银染法定量ssDNA | 第23页 |
| 2.3.2 固相分离方法与液相分离方法的比较 | 第23-24页 |
| 2.3.3 KOH预处理对不同纤维素膜吸附率的影响 | 第24-25页 |
| 2.3.4 低吸附率膜的选择 | 第25页 |
| 2.4 PCR条件优化 | 第25-28页 |
| 2.4.1 对称PCR条件优化 | 第25-27页 |
| 2.4.2 不对称PCR条件优化 | 第27-28页 |
| 2.5 不同纯化方法对不对称PCR产物回收率的影响 | 第28-29页 |
| 2.5.1 常规纯化ssDNA方法 | 第28页 |
| 2.5.2 挤压/反复冻融法纯化ssDNA | 第28-29页 |
| 2.6 优化方法与经典SELEX方法的比较 | 第29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-41页 |
| 3.1 引物的选择 | 第29-31页 |
| 3.2 文库的质量鉴定 | 第31-33页 |
| 3.2.1 琼脂糖凝胶电泳的质量鉴定 | 第31-32页 |
| 3.2.2 聚丙烯酰胺电泳质量鉴定 | 第32-33页 |
| 3.3 尿素变性PAGE银染法定量ssDNA | 第33-34页 |
| 3.4 固相分离方法与液相分离方法的比较 | 第34-35页 |
| 3.5 KOH预处理对不同纤维素膜吸附率的影响 | 第35-36页 |
| 3.6 低吸附率膜的筛选 | 第36-38页 |
| 3.7 对称PCR条件优化 | 第38-39页 |
| 3.8 不对称PCR条件优化 | 第39-40页 |
| 3.9 不同纯化方法对不对称PCR产物回收率的影响 | 第40页 |
| 3.10 优化方法与经典SELEX方法的比较 | 第40-41页 |
| 4 小结与讨论 | 第41-43页 |
| 4.1 小结 | 第41-42页 |
| 4.2 讨论 | 第42-43页 |
| 第三章 金黄色葡萄球菌肠毒素A适配体的筛选 | 第43-58页 |
| 1 材料 | 第43页 |
| 1.1 菌株 | 第43页 |
| 1.2 主要仪器 | 第43页 |
| 1.3 主要试剂 | 第43页 |
| 2 方法 | 第43-51页 |
| 2.1 几种溶液的配制 | 第43-44页 |
| 2.2 SEA检定 | 第44-45页 |
| 2.2.1 SDS-PAGE | 第44-45页 |
| 2.2.2 考马斯亮蓝染色 | 第45页 |
| 2.3 SEA的SELEX筛选 | 第45-48页 |
| 2.3.1 结合孵育 | 第45-46页 |
| 2.3.2 分离 | 第46-47页 |
| 2.3.3 冲洗 | 第47页 |
| 2.3.4 洗脱 | 第47页 |
| 2.3.5 亚文库的制备 | 第47-48页 |
| 2.4 PCR-SSCP技术分离单一适配体 | 第48-51页 |
| 2.4.1 末轮亚文库的对称PCR | 第48-49页 |
| 2.4.2 对称PCR产物的回收纯化 | 第49页 |
| 2.4.3 PCR产物与PMD18-T的连接 | 第49页 |
| 2.4.4 感受态细胞的制备 | 第49页 |
| 2.4.5 大肠杆菌DH5α的转化 | 第49页 |
| 2.4.6 挑平板进行菌落PCR | 第49-50页 |
| 2.4.7 菌落PCR产物的PAGE检定 | 第50页 |
| 2.4.8 测序 | 第50-51页 |
| 3 结果与分析 | 第51-56页 |
| 3.1 SEA的SDS-PAGE鉴定 | 第51页 |
| 3.2 单双链分离结果 | 第51-52页 |
| 3.3 测序前回收纯化及验证 | 第52-53页 |
| 3.4 菌落PCR产物PAGE | 第53-56页 |
| 3.5 测序结果 | 第56页 |
| 4 小结与讨论 | 第56-58页 |
| 4.1 小结 | 第56页 |
| 4.2 讨论 | 第56-58页 |
| 第四章 适配体的分子模拟及功能的初步验证 | 第58-72页 |
| 1 计算平台配置 | 第58页 |
| 2 三维构型的模建 | 第58-59页 |
| 3 SEA与适配体的对接 | 第59页 |
| 4 适配体功能的初步验证 | 第59-60页 |
| 4.1 腹水和SEA最佳工作浓度的确定 | 第59页 |
| 4.2 适配体直接竞争ELISA | 第59-60页 |
| 5 结果和讨论 | 第60-72页 |
| 5.1 构象分析 | 第60-62页 |
| 5.2 分子的对接 | 第62-69页 |
| 5.3 适配体直接竞争ELISA分析 | 第69-70页 |
| 5.4 讨论 | 第70-72页 |
| 第五章 总结与展望 | 第72-74页 |
| 1 总结 | 第72-73页 |
| 2 展望 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 附录 | 第84-89页 |
