淀粉糖化酶抗体的研制及其双抗夹心ELISA法的初步建立与应用
| 中文摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-10页 |
| 符号说明 | 第10-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-21页 |
| 1 淀粉糖化酶(GA)概述 | 第12-15页 |
| ·糖化酶的结构 | 第12-13页 |
| ·糖化酶催化域(CD)的功能 | 第13页 |
| ·淀粉糖化酶的主要来源 | 第13-14页 |
| ·淀粉糖化酶值的测定方法 | 第14页 |
| ·淀粉糖化酶的应用 | 第14-15页 |
| 2 蜂产品及其质量存在的主要问题 | 第15-17页 |
| ·蜂蜜及其蜂产品现状 | 第15-16页 |
| ·蜂产品质量存在的主要问题 | 第16-17页 |
| 3 蜂蜜中掺入植物糖的鉴别方法 | 第17-20页 |
| ·日常生活中真假蜂蜜的简单鉴别方法 | 第18页 |
| ·碳稳定同位素比值分析法(SIRA) | 第18-19页 |
| ·淀粉酶同工酶凝胶电泳法 | 第19页 |
| ·利用贮存的温度对淀粉酶值和蛋白含量的影响检测 | 第19页 |
| ·红外光谱鉴别法 | 第19页 |
| ·色谱分析法 | 第19页 |
| ·高效阴离子交换色谱-脉冲安培检测法 | 第19-20页 |
| 4 本研究的目的和意义 | 第20-21页 |
| 第二章 淀粉糖化酶纯度及蛋白浓度的测定 | 第21-26页 |
| 1 试验材料和方法 | 第21-23页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·仪器与设备 | 第21页 |
| ·主要溶液系统 | 第21-22页 |
| ·GA的纯度测定 | 第22-23页 |
| ·Lowry法测GA的蛋白浓度 | 第23页 |
| 2 结果与分析 | 第23-24页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果 | 第23页 |
| ·GA蛋白浓度结果 | 第23-24页 |
| 3 讨论 | 第24-26页 |
| 第三章 抗淀粉糖化酶抗体的研制及鉴定 | 第26-43页 |
| 1 材料和方法 | 第26-35页 |
| ·实验动物及骨髓瘤细胞 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·试验仪器与耗材 | 第26-27页 |
| ·主要溶液系统 | 第27-28页 |
| ·抗GA兔多克隆抗体的制备及鉴定 | 第28-30页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第30-33页 |
| ·单克隆抗体性质的鉴定 | 第33页 |
| ·单抗的抗原识别位点的鉴定 | 第33-34页 |
| ·酶标单抗的制备及工作浓度的确定 | 第34-35页 |
| 2 结果及分析 | 第35-39页 |
| ·包被抗原工作浓度及阳性血清效价的确定 | 第35页 |
| ·单克隆抗体细胞株的建立及稳定性 | 第35页 |
| ·腹水的制备 | 第35页 |
| ·抗体的鉴定 | 第35-37页 |
| ·单克隆抗体亚类的鉴定 | 第37-38页 |
| ·单抗的抗原识别位点分析结果 | 第38-39页 |
| ·酶标单抗工作浓度的确定 | 第39页 |
| 3 讨论 | 第39-43页 |
| ·动物免疫 | 第39-40页 |
| ·细胞融合、培养与筛选 | 第40页 |
| ·ELISA试验的优化 | 第40-41页 |
| ·Western-blot分析 | 第41页 |
| ·单克隆抗体的抗原位点识别分析 | 第41页 |
| ·辣根过氧化物酶(HRP)标记单抗 | 第41-43页 |
| 第四章 双抗夹心ELISA方法的建立及初步应用 | 第43-49页 |
| 1 材料和方法 | 第43-45页 |
| ·试验样品 | 第43页 |
| ·试剂和仪器 | 第43页 |
| ·双抗夹心ELISA检测法的建立 | 第43-44页 |
| ·包被抗体的选择 | 第44页 |
| ·双抗夹心ELISA反应条件的确定 | 第44页 |
| ·双抗夹心ELISA特异性试验 | 第44页 |
| ·样品基质干扰检测 | 第44页 |
| ·样品添加回收试验 | 第44-45页 |
| 2 结果分析 | 第45-47页 |
| ·包被抗体的选择结果 | 第45页 |
| ·双抗夹心ELISA反应条件的确定 | 第45页 |
| ·双抗夹心ELISA特异性试验 | 第45-46页 |
| ·样品基质干扰检测结果 | 第46页 |
| ·绘制标准曲线的结果 | 第46-47页 |
| ·添加回收率试验及重复性 | 第47页 |
| 3 讨论 | 第47-49页 |
| 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-53页 |
| 致谢 | 第53-54页 |
| 攻读学位期间发表的文章目录 | 第54-55页 |
