| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-15页 |
| 符号与缩略语 | 第15-16页 |
| 第一章 综述 | 第16-32页 |
| ·β-丙氨酸研究进展 | 第16-23页 |
| ·β-丙氨酸简介 | 第16页 |
| ·β-丙氨酸的应用 | 第16-18页 |
| ·合成泛酸钙 | 第16-17页 |
| ·合成肌肽 | 第17页 |
| ·合成β-丙氨酸金属配合物 | 第17-18页 |
| ·合成帕米膦酸钠 | 第18页 |
| ·合成巴柳氮 | 第18页 |
| ·其它应用 | 第18页 |
| ·β-丙氨酸在生物体内的主要合成代谢途径 | 第18-20页 |
| ·β-丙氨酸的生产方法 | 第20-23页 |
| ·化学法 | 第20-22页 |
| ·丙烯腈法 | 第20-21页 |
| ·丙烯酸法 | 第21页 |
| ·琥珀酰亚胺(丁二酰亚胺)降解法 | 第21-22页 |
| ·β-氨基丙腈法 | 第22页 |
| ·生物法 | 第22-23页 |
| ·L-天冬氨酸α-脱羧酶研究进展 | 第23-28页 |
| ·PanD的结构及形成机制 | 第23-24页 |
| ·PanD的结构 | 第23-24页 |
| ·PanD的形成机制 | 第24页 |
| ·PanD的酶学性质 | 第24-26页 |
| ·PanD的专一性及反应常数 | 第24-25页 |
| ·PanD的最适温度和最适pH值 | 第25页 |
| ·PanD的酶活抑制剂 | 第25-26页 |
| ·酶活的测定方法 | 第26页 |
| ·放射性同位素标记法 | 第26页 |
| ·测定~(14)CO_2含量 | 第26页 |
| ·测定β-[1-~(14)C]-丙氨酸含量 | 第26页 |
| ·高效液相色谱法 | 第26页 |
| ·panD基因的克隆与表达 | 第26-28页 |
| ·C.glutamicum panD的克隆与表达 | 第27页 |
| ·E.coli panD的克隆与表达 | 第27页 |
| ·M.tuberculosis panD的克隆与表达 | 第27-28页 |
| ·PanD的应用 | 第28页 |
| ·手性拆分制备D-天门冬氨酸和β-丙氨酸 | 第28页 |
| ·PanD作为药物作用的靶标 | 第28页 |
| ·重组E.coli的培养 | 第28-30页 |
| ·宿主菌 | 第28-29页 |
| ·培养条件 | 第29-30页 |
| ·诱导条件 | 第30页 |
| ·选题背景、目的及主要内容 | 第30-32页 |
| 第二章 分析方法的建立 | 第32-48页 |
| ·材料与方法 | 第32-35页 |
| ·药品与试剂 | 第32-33页 |
| ·仪器设备 | 第33页 |
| ·衍生化试剂的配制 | 第33-34页 |
| ·碳酸氢钠(NaHCO_3)溶液的配制 | 第33页 |
| ·2,4-二硝基氟苯乙腈溶液的配制 | 第33页 |
| ·平衡溶液的配制 | 第33-34页 |
| ·样品的衍生化方法 | 第34页 |
| ·流动相的配置 | 第34页 |
| ·流动相A的配制 | 第34页 |
| ·流动相B的配制 | 第34页 |
| ·色谱条件 | 第34页 |
| ·氨基酸的定性与定量方法 | 第34-35页 |
| ·定性方法:采用保留值比较法及叠加法 | 第34-35页 |
| ·定量方法:外标法 | 第35页 |
| ·结果与讨论 | 第35-47页 |
| ·HPLC法流动相的选择 | 第35-41页 |
| ·流动相配比及梯度的选择 | 第35-38页 |
| ·流速的影响 | 第38-39页 |
| ·盐浓度对分离结果的影响 | 第39-40页 |
| ·pH值的影响 | 第40-41页 |
| ·仪器稳定性研究 | 第41-42页 |
| ·氨基酸浓度与衍生化试剂用量的关系 | 第42-43页 |
| ·衍生反应稳定性研究 | 第43页 |
| ·方法线性范围测定 | 第43-44页 |
| ·方法回收率测定 | 第44-45页 |
| ·检测限 | 第45页 |
| ·氨基酸的定性与定量 | 第45-47页 |
| ·氨基酸的定性 | 第45-47页 |
| ·本章小结 | 第47-48页 |
| 第三章、L-天冬氨酸α-脱羧酶基因的克隆与鉴定 | 第48-66页 |
| ·前言 | 第48页 |
| ·材料与方法 | 第48-57页 |
| ·菌种与质粒 | 第48-49页 |
| ·仪器与DNA分析软件 | 第49-50页 |
| ·主要药品与试剂 | 第50-51页 |
| ·培养基 | 第51页 |
| ·LB培养基 | 第51页 |
| ·SOB培养基 | 第51页 |
| ·引物 | 第51页 |
| ·实验方法 | 第51-57页 |
| ·细菌基因组DNA的提取 | 第51-52页 |
| ·DNA的测定 | 第52页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳检测DNA | 第52页 |
| ·紫外分光光度法测定DNA浓度 | 第52页 |
| ·PCR技术扩增目的基因 | 第52-53页 |
| ·质粒抽提 | 第53页 |
| ·PCR扩增产物与质粒的纯化 | 第53-54页 |
| ·PCR产物和质粒的双酶切 | 第54页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第54-55页 |
| ·连接反应 | 第55页 |
| ·连接产物转化E.coli DH5α | 第55页 |
| ·转化子的筛选 | 第55-56页 |
| ·pUC19载体转化子的蓝白筛选 | 第55-56页 |
| ·pET28b(+)载体转化子的筛选 | 第56页 |
| ·重组菌株的获得 | 第56页 |
| ·甘油冷冻法简易保存菌种 | 第56页 |
| ·重组蛋白的SDS-PAGE分析 | 第56-57页 |
| ·重组蛋白的酶活性分析 | 第57页 |
| ·结果与讨论 | 第57-64页 |
| ·细菌基因组的提取与测定 | 第57-58页 |
| ·细菌基因组的电泳结果 | 第57-58页 |
| ·紫外分光光度法测定细菌基因组浓度 | 第58页 |
| ·PCR方法扩增panD基因 | 第58-60页 |
| ·pET28b(+)质粒的提取 | 第60-61页 |
| ·重组质粒的获得与酶切鉴定 | 第61-62页 |
| ·重组菌株的获得与鉴定 | 第62-64页 |
| ·目的基因测序鉴定结果 | 第62页 |
| ·重组蛋白SDS-PAGE结果 | 第62-64页 |
| ·重组PanD酶活性检测结果 | 第64页 |
| ·本章小结 | 第64-66页 |
| 第四章 酶合成条件的优化 | 第66-83页 |
| ·材料与方法 | 第66-71页 |
| ·菌种来源 | 第66页 |
| ·药品与试剂 | 第66页 |
| ·主要仪器设备 | 第66-67页 |
| ·培养基 | 第67页 |
| ·斜面培养基 | 第67页 |
| ·种子培养基 | 第67页 |
| ·发酵培养基 | 第67页 |
| ·转化液 | 第67页 |
| ·方法 | 第67-71页 |
| ·菌种斜面活化 | 第67页 |
| ·菌种接种子培养基 | 第67-68页 |
| ·酶在细胞内外的分布 | 第68页 |
| ·发酵液的酶活测定 | 第68页 |
| ·上清液、菌体的酶活测定 | 第68页 |
| ·菌体破壁后的酶活测定 | 第68页 |
| ·摇瓶发酵工艺的确定 | 第68-71页 |
| ·诱导物添加时间对产酶的影响 | 第68-70页 |
| ·培养过夜种子液的O.D._(600)值 | 第68-69页 |
| ·生长曲线的绘制 | 第69页 |
| ·1%接种量时诱导物添加时间对产酶的影响 | 第69页 |
| ·3.3%接种量时诱导物添加时间对产酶的影响 | 第69-70页 |
| ·诱导物浓度对产酶的影响 | 第70页 |
| ·诱导温度与时间对产酶的的影响 | 第70页 |
| ·溶氧条件对产酶的的影响 | 第70页 |
| ·优化条件的验证 | 第70-71页 |
| ·PanD酶活测定 | 第71页 |
| ·计算公式 | 第71页 |
| ·结果与讨论 | 第71-81页 |
| ·酶分布的确定 | 第71-72页 |
| ·诱导物添加时间对产酶的影响 | 第72-76页 |
| ·种子液的O.D._(600)值 | 第72-73页 |
| ·1%接种量 | 第73-74页 |
| ·3.3%接种量 | 第74-76页 |
| ·诱导物浓度对产酶的影响 | 第76-78页 |
| ·IPTG浓度对产酶的影响 | 第76-77页 |
| ·乳糖浓度对产酶的影响 | 第77-78页 |
| ·诱导温度与时间对产酶的影响 | 第78-79页 |
| ·溶氧条件对产酶的影响 | 第79-80页 |
| ·最佳条件下的产酶能力验证 | 第80-81页 |
| ·本章小结 | 第81-83页 |
| 第五章 转化酶促反应的初步研究 | 第83-91页 |
| ·材料与方法 | 第83-85页 |
| ·菌种来源 | 第83页 |
| ·斜面培养基及培养条件 | 第83页 |
| ·摇瓶培养基及培养条件 | 第83-84页 |
| ·一级种子培养基及培养条件 | 第83页 |
| ·二级发酵培养基及培养条件 | 第83-84页 |
| ·主要材料 | 第84页 |
| ·主要仪器设备 | 第84页 |
| ·方法 | 第84-85页 |
| ·底物盐的类型对转化反应的影响 | 第84页 |
| ·底物浓度对转化反应的影响 | 第84页 |
| ·底物pH值对转化反应的影响 | 第84-85页 |
| ·温度对转化反应的影响 | 第85页 |
| ·转化时间对转化反应的影响 | 第85页 |
| ·转化条件的验证 | 第85页 |
| ·实验结果 | 第85-90页 |
| ·底物盐的类型对转化反应的影响 | 第85-86页 |
| ·底物浓度对转化反应的影响 | 第86-87页 |
| ·底物pH值对转化反应的影响 | 第87页 |
| ·温度对转化反应的影响 | 第87-88页 |
| ·转化时间对转化反应的影响 | 第88-89页 |
| ·转化条件的优化 | 第89-90页 |
| ·本章小结 | 第90-91页 |
| 第六章 结论与展望 | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-99页 |
| 附录 | 第99-102页 |
| 致谢 | 第102-103页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第103页 |