| 1前言 | 第1-21页 |
| ·PHAs及其应用 | 第8-11页 |
| ·PHAs的分类及性质 | 第8-9页 |
| ·PHAs的应用 | 第9-11页 |
| ·农业领域 | 第9页 |
| ·医药领域 | 第9页 |
| ·高分子材料 | 第9-10页 |
| ·组织工程领域 | 第10-11页 |
| ·环境检测 | 第11页 |
| ·包装材料 | 第11页 |
| ·其他领域 | 第11页 |
| ·PHA合成酶的特性及其克隆方案 | 第11-18页 |
| ·PHA合成酶的特性和分类 | 第11-13页 |
| ·PHA代谢及其其它相关途径中的酶及基因 | 第13-14页 |
| ·PHA合成酶的基因排列规律 | 第14-16页 |
| ·PHA合成酶基因的克隆方案 | 第16-18页 |
| ·PCR文库筛选法 | 第17页 |
| ·异源表达文库筛选法 | 第17-18页 |
| ·核酸杂交筛选文库 | 第18页 |
| ·生物素标记的基因捕获技术 | 第18页 |
| ·PHA研究的前景展望 | 第18-19页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第19-21页 |
| 2.材料与方法 | 第21-36页 |
| ·材料 | 第21-23页 |
| ·菌种和质粒 | 第21页 |
| ·常用酶和生化试剂 | 第21-22页 |
| ·本研究所用酶及试剂盒 | 第21-22页 |
| ·分子生物学常用生化试剂 | 第22页 |
| ·植物材料 | 第22页 |
| ·主要仪器设备 | 第22-23页 |
| ·技术路线 | 第23-24页 |
| ·方法 | 第24-36页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第24-26页 |
| ·质粒DNA的小量提取—碱裂解法(见SAMBROOK ET AL，1989) | 第24页 |
| ·质粒DNA的大量提取和纯化—碱裂解法 | 第24-25页 |
| ·基因组DNA的提取-碱法提取YS1中的基因组DNA(见奥斯伯等，1992) | 第25页 |
| ·1％的琼脂糖凝胶电泳检测DNA的纯度及浓度 | 第25-26页 |
| ·两套探针的制备 | 第26-27页 |
| ·引物的设计 | 第26页 |
| ·PSEUDOMONAS PSEUDOALCALIGENESE YS1基因组DNA的PCR扩增 | 第26页 |
| ·PCR扩增产物的回收与纯化 | 第26-27页 |
| ·DNA探针的制备 | 第27页 |
| ·点杂交初筛BAC文库重组转化子 | 第27-28页 |
| ·加样杂交 | 第27-28页 |
| ·洗膜 | 第28页 |
| ·底物反应 | 第28页 |
| ·质粒DNA的亚克隆实验 | 第28-30页 |
| ·质粒DNA的大量提取 | 第28页 |
| ·质粒DNA／载体DNA酶切、去磷酸化 | 第28页 |
| ·回收 | 第28-29页 |
| ·连接 | 第29页 |
| ·大肠杆菌DH5A感受态细胞的制备(郝林等，1995；彭秀玲等，1997) | 第29页 |
| ·连接产物的转化(谭文斌等，1996) | 第29页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第29-30页 |
| ·亚克隆重组子进一步克隆分析 | 第30页 |
| ·阳性克隆子的点杂交检测 | 第30页 |
| ·SOUTHERN杂交检测(SAMBROOK ET AL，1989) | 第30-31页 |
| ·制胶、加样 | 第30页 |
| ·转膜 | 第30-31页 |
| ·烤膜、杂交 | 第31页 |
| ·洗膜 | 第31页 |
| ·底物反应 | 第31页 |
| ·重组菌的摇瓶发酵实验(洪葵等，1998) | 第31-32页 |
| ·碳源实验 | 第31页 |
| ·摇瓶实验 | 第31-32页 |
| ·PHA抽提 | 第32页 |
| ·DNA测序分析 | 第32页 |
| ·转基因烟草植株的鉴定 | 第32-35页 |
| ·烟草总DNA的提取与纯化(SDS法)(王关林等，1998) | 第32-33页 |
| ·PCR、PCR-SOUTHERN鉴定转基因植株 | 第33-35页 |
| ·SOUTHERN BLOT检测 | 第35页 |
| ·卡那霉素抗性大田直接筛选转化植株 | 第35页 |
| ·氯仿-次氯酸钠法抽提获得PHA粗品 | 第35-36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-45页 |
| ·用斑点杂交技术从类产碱假单胞菌YS1 BAC文库初筛PHB合酶基因 | 第36-37页 |
| ·YS1 BAC文库转化子的提取 | 第36页 |
| ·SOUTHERN杂交筛选探针的制备 | 第36-37页 |
| ·SOUTHERN斑点杂交筛选P. PSEUDOALCALIGENESE YS1 BAC文库 | 第37页 |
| ·SOUTHERN BLOT复筛阳性转化子 | 第37-41页 |
| ·几个强阳性转化子酶切反应条件的优化 | 第37-38页 |
| ·5B_(10)亚克隆分析鉴定 | 第38-39页 |
| ·pH22-9亚克隆进一步分析鉴定 | 第39-40页 |
| ·pH22-E5，pH22-E4 SOUTHERN BLOT检测 | 第40-41页 |
| ·测序 | 第41页 |
| ·重组菌的摇瓶发酵实验 | 第41页 |
| ·PHA合成酶基因在转基因烟草中的稳定性分析 | 第41-45页 |
| ·转基因烟草各后代基因组DNA的小量提取 | 第41-42页 |
| ·PCR、PCR-SOUTHERN BLOT检测转基因植株 | 第42-43页 |
| ·T_1代PCR扩增结果 | 第43页 |
| ·T_2代PCR扩增结果 | 第43页 |
| ·卡那霉素抗性大田直接筛选转化植株 | 第43-44页 |
| ·SOUTHERN BLOT检测 | 第44页 |
| ·氯仿-次氯酸钠法抽提植物中的PHA | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-51页 |
| ·关于基因组BAC文库的核酸杂交筛选 | 第45-47页 |
| ·利用重组菌生产PHA | 第47-48页 |
| ·关于转基因植物的遗传分析 | 第48-51页 |
| 5 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-58页 |
| 缩略语 | 第58-59页 |
| 附图 | 第59-62页 |
| 附录 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
