| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5页 |
| 前言 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-21页 |
| 1.1 木质纤维素乙醇概述 | 第10-13页 |
| 1.1.1 国内外纤维素乙醇的研究进展 | 第10页 |
| 1.1.2 纤维素乙醇生产概述 | 第10-11页 |
| 1.1.3 木质纤维素的主要组分 | 第11-12页 |
| 1.1.4 木质纤维素乙醇生产工艺 | 第12-13页 |
| 1.2 葡萄糖、木糖同步共利用概述 | 第13-18页 |
| 1.2.1 开发利用木糖的重要性 | 第13页 |
| 1.2.2 木糖利用酿酒酵母的构建 | 第13-15页 |
| 1.2.3 原生质体融合构建木糖利用酵母 | 第15页 |
| 1.2.4 磷酸解酮途径在木糖利用酿酒酵母中的应用 | 第15-17页 |
| 1.2.5 混糖发酵过程中葡萄糖抑制效应 | 第17-18页 |
| 1.3 开发同步共利用五六碳糖酿酒酵母菌株的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.3.1 改善木糖转运提高菌株葡萄糖、木糖同步共利用能力 | 第18-19页 |
| 1.3.2 改进预处理及发酵工艺促进五六碳糖同步共利用 | 第19页 |
| 1.3.3 通过进化工程获得葡萄糖、木糖同步共利用菌株 | 第19页 |
| 1.4 本课题的主要内容 | 第19-21页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第21-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-27页 |
| 2.1.1 实验用菌株 | 第21-22页 |
| 2.1.2 实验用质粒及引物 | 第22-24页 |
| 2.1.3 培养基配制 | 第24-25页 |
| 2.1.4 实验试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.5 实验仪器 | 第26-27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-34页 |
| 2.2.1 目的片段的PCR扩增及产物回收 | 第27-28页 |
| 2.2.2 酶切与连接反应 | 第28页 |
| 2.2.3 连接产物或质粒转化大肠杆菌感受态细胞 | 第28-29页 |
| 2.2.4 阳性转化子筛选验证及测序 | 第29页 |
| 2.2.5 大肠杆菌质粒提取 | 第29-30页 |
| 2.2.6 DNA产物纯化 | 第30页 |
| 2.2.7 DNA产物胶回收 | 第30-31页 |
| 2.2.8 酵母转化 | 第31-32页 |
| 2.2.9 酵母基因组提取 | 第32页 |
| 2.2.10 酵母质粒提取 | 第32-33页 |
| 2.2.11 酵母菌落PCR操作方法 | 第33-34页 |
| 2.3 酶活测定 | 第34-36页 |
| 2.3.1 粗酶液的制备 | 第34页 |
| 2.3.2 蛋白质含量的测定 | 第34页 |
| 2.3.3 酶活性测定 | 第34-36页 |
| 2.4 qPCR定量基因转录强度 | 第36-37页 |
| 2.4.1 总RNA提取 | 第36页 |
| 2.4.2 mRNA的反转录 | 第36页 |
| 2.4.3 实时定量PCR测定 | 第36-37页 |
| 2.4.4 数据分析 | 第37页 |
| 2.5 细胞培养 | 第37页 |
| 2.6 产物的HPLC方法检测 | 第37-39页 |
| 第三章 过表达ZWF1对葡萄糖和木糖代谢的影响 | 第39-52页 |
| 3.1 过表达不同来源的 6-磷酸葡萄糖脱氢酶基因 | 第39-43页 |
| 3.1.1 6-磷酸葡萄糖脱氢酶基因来源的选择 | 第39-40页 |
| 3.1.2 不同源 6-磷酸葡萄糖脱氢酶基因表达质粒的构建 | 第40-41页 |
| 3.1.3 构建完成质粒转化底盘菌株 | 第41页 |
| 3.1.4 不同源木酮糖激酶对菌株生长的影响 | 第41-42页 |
| 3.1.5 表达不同源 6-磷酸葡萄糖脱氢酶对菌株发酵的影响 | 第42-43页 |
| 3.2 不同强度过表达ZWF1对菌株葡萄糖和木糖利用情况的影响 | 第43-47页 |
| 3.2.1 不同强度过表达ZWF1菌株的构建 | 第43-44页 |
| 3.2.2 不同强度过表达ZWF1对菌株生长的影响 | 第44-45页 |
| 3.2.3 不同强度过表达ZWF1对菌株发酵性能的影响 | 第45-47页 |
| 3.3 重组菌株ZWF1转录水平和 6-磷酸葡萄糖脱氢酶酶活测定 | 第47-48页 |
| 3.4 不同糖浓度下菌株发酵性能的验证 | 第48-49页 |
| 3.5 在SyBE_Sc17002中过表达ZWF1对葡萄糖和木糖代谢的影响 | 第49-51页 |
| 3.6 本章小结 | 第51-52页 |
| 第四章 下调PGI1对木糖利用菌株糖代谢的影响 | 第52-60页 |
| 4.1 替换启动子的选择及替换片段的设计 | 第52-53页 |
| 4.2 替换PGI1启动子菌株的构建及筛选 | 第53页 |
| 4.3 更换启动子对菌株生长状态的影响 | 第53-54页 |
| 4.4 更换启动子对菌株混糖发酵的影响 | 第54-56页 |
| 4.5 下调PGI1启动子菌株转录水平和酶活测定 | 第56-57页 |
| 4.6 双调控菌株葡萄糖木糖共发酵研究 | 第57-58页 |
| 4.7 本章小结 | 第58-60页 |
| 第五章 融合表达HXK2和ZWF1及敲除HXK1，HXK2对菌株糖代谢的影响 | 第60-65页 |
| 5.1 融合基因HXK2-ZWF1，ZWF1-HXK2的设计与表达 | 第60-61页 |
| 5.2 表达融合基因菌株混糖发酵性能验证 | 第61-62页 |
| 5.3 敲除HXK1，HXK2基因片段的设计与克隆 | 第62-63页 |
| 5.4 敲除HXK1，HXK2菌株混糖发酵 | 第63-64页 |
| 5.5 本章小结 | 第64-65页 |
| 第六章 结论与展望 | 第65-67页 |
| 6.1 结论 | 第65-66页 |
| 6.2 展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
