苹果酸脱氢酶包涵体的表达及复性研究
| 中文摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-9页 |
| 前言 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-28页 |
| ·苹果酸脱氢酶的简介 | 第10-16页 |
| ·苹果酸脱氢酶的理化性质及生理功能 | 第10-11页 |
| ·苹果酸脱氢酶的用途 | 第11页 |
| ·苹果酸脱氢酶的结构分析 | 第11-14页 |
| ·苹果酸脱氢酶活性检测 | 第14-15页 |
| ·苹果酸脱氢酶的表达研究 | 第15-16页 |
| ·基因工程重组蛋白质在大肠杆菌中的表达 | 第16-20页 |
| ·目标基因获得——PCR 技术 | 第16-18页 |
| ·表达载体选择 | 第18页 |
| ·表达产物的定位 | 第18-20页 |
| ·包涵体蛋白质复性 | 第20-26页 |
| ·蛋白质体外复性 | 第20-23页 |
| ·复性动力学模型 | 第23-24页 |
| ·苹果酸脱氢酶复性的研究现状 | 第24-26页 |
| ·本文的研究意义及主要内容 | 第26-28页 |
| 第二章 苹果酸脱氢酶的表达 | 第28-47页 |
| ·实验材料 | 第28-30页 |
| ·菌种和载体 | 第28页 |
| ·工具酶及分子量参照物 | 第28-29页 |
| ·主要化学试剂 | 第29页 |
| ·主要仪器 | 第29-30页 |
| ·引物合成 | 第30页 |
| ·实验方法 | 第30-38页 |
| ·PCR 扩增目的基因 | 第30-33页 |
| ·pBV220-eMDH 表达质粒的构建 | 第33-34页 |
| ·pBV220-eMDH 的转化及阳性克隆的筛选 | 第34-36页 |
| ·目标蛋白质在大肠杆菌中的诱导表达 | 第36-37页 |
| ·SDS-聚丙稀酰胺凝胶电泳检测表达产物 | 第37-38页 |
| ·蛋白质含量的测定 | 第38页 |
| ·结果与讨论 | 第38-45页 |
| ·PCR 产物的酶切鉴定 | 第38-39页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第39-41页 |
| ·目标基因的序列测定 | 第41-44页 |
| ·基因工程菌生长曲线的测定 | 第44页 |
| ·表达产物的鉴定 | 第44-45页 |
| ·表达产物蛋白质含量的测定 | 第45页 |
| ·本章小结 | 第45-47页 |
| 第三章 苹果酸脱氢酶包涵体的纯化、变性及复性 | 第47-73页 |
| ·实验材料和设备 | 第47-48页 |
| ·实验方法 | 第48-50页 |
| ·包涵体纯化 | 第48-49页 |
| ·包涵体的溶解和变性 | 第49页 |
| ·包涵体的复性 | 第49-50页 |
| ·荧光光谱分析 | 第50页 |
| ·圆二色光谱分析 | 第50页 |
| ·体积排阻色谱分析 | 第50页 |
| ·苹果酸脱氢酶活性测定 | 第50页 |
| ·结果及讨论 | 第50-71页 |
| ·包涵体纯化结果 | 第50-51页 |
| ·包涵体变性时间对复性效果的影响 | 第51-52页 |
| ·苹果酸脱氢酶包涵体复性初探 | 第52-57页 |
| ·人工伴侣辅助苹果酸脱氢酶包涵体复性条件探索 | 第57-64页 |
| ·人工伴侣辅助复性的复性产物结构分析 | 第64-69页 |
| ·人工伴侣辅助复性的温度动力学分析 | 第69-71页 |
| ·本章小结 | 第71-73页 |
| 第四章 结论与展望 | 第73-75页 |
| ·结论 | 第73-74页 |
| ·展望 | 第74-75页 |
| 附录 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-83页 |
| 发表论文情况 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
