| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第10-20页 |
| 1.1 引言 | 第10页 |
| 1.2 葡萄糖的跨膜转运途径 | 第10-14页 |
| 1.2.1 磷酸转移酶系统(PTS) | 第11-12页 |
| 1.2.2 非磷酸转移酶系统(non-PTS) | 第12-14页 |
| 1.3 类球红细菌 | 第14-15页 |
| 1.3.1 类球红细菌的特性 | 第14页 |
| 1.3.2 类球红细菌的质粒 | 第14-15页 |
| 1.3.3 类球红细菌的遗传信息研究现状 | 第15页 |
| 1.4 类球红细菌以葡萄糖为底物的代谢 | 第15-18页 |
| 1.4.1 类球红细菌ED代谢途径 | 第16-17页 |
| 1.4.2 类球红细菌葡萄糖代谢图谱 | 第17-18页 |
| 1.5 本课题的研究思路 | 第18-20页 |
| 1.5.1 研究背景及意义 | 第18页 |
| 1.5.2 研究内容 | 第18-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-25页 |
| 2.1.1 菌株及质粒 | 第20-21页 |
| 2.1.2 药品及试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.3 仪器和设备 | 第22-23页 |
| 2.1.4 培养基及溶液 | 第23-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-40页 |
| 2.2.1 R.sphaeroides 2.4.1基因组提取 | 第25-26页 |
| 2.2.2 制备大肠杆菌感受态 | 第26页 |
| 2.2.3 敲除载体pLH146 | 第26页 |
| 2.2.4 敲除载体pLH359(pLH146::glkLR)的构建 | 第26-30页 |
| 2.2.5 敲除载体pLH369(pLH146: fruALR)的构建 | 第30-31页 |
| 2.2.6 敲除载体pLH394(pLH146:: Rsp-2673LR)的构建 | 第31-32页 |
| 2.2.7 表达载体pLH315 | 第32页 |
| 2.2.8 表达载体pLH424(pLH315::glk)的构建 | 第32-33页 |
| 2.2.9 表达载体pLH425(pLH315::edd)的构建 | 第33页 |
| 2.2.10 表达载体pLH426(pLH315::glk_(E.coli))的构建 | 第33-34页 |
| 2.2.11 表达载体pLH427(pLH315::galP_(E.coli))的构建 | 第34页 |
| 2.2.12 质粒接合转移方法 | 第34-35页 |
| 2.2.13 类球红细菌突变菌株的筛选与鉴定 | 第35-36页 |
| 2.2.14 类球红细菌RNA的提取及qRT-PCR | 第36-38页 |
| 2.2.15 类球红细菌表型分析 | 第38页 |
| 2.2.16 类球红细菌葡萄糖发酵的分析测定 | 第38-40页 |
| 3 结果与讨论 | 第40-70页 |
| 3.1 葡萄糖跨膜转运与代谢相关基因的生物学信息 | 第40-41页 |
| 3.2 类球红细菌基因组DNA提取 | 第41-42页 |
| 3.3 敲除载体部分 | 第42-45页 |
| 3.3.1 pLH359 | 第42-43页 |
| 3.3.2 pLH369 | 第43-44页 |
| 3.3.3 pLH394 | 第44-45页 |
| 3.4 敲除菌株部分 | 第45-54页 |
| 3.4.1 Δglk筛选 | 第46-47页 |
| 3.4.2 ΔfruA筛选 | 第47-48页 |
| 3.4.3 ΔglkΔfruA筛选 | 第48-49页 |
| 3.4.4 ΔRsp-2673筛选 | 第49-51页 |
| 3.4.5 ΔRsp-2673Δglk筛选 | 第51-52页 |
| 3.4.6 ΔRsp-2673ΔfruA筛选 | 第52-53页 |
| 3.4.7 ΔRsp-2673ΔglkΔfruA筛选 | 第53-54页 |
| 3.5 过表达载体部分 | 第54-57页 |
| 3.5.1 pLH424 | 第54-55页 |
| 3.5.2 pLH425 | 第55-56页 |
| 3.5.3 pLH426 | 第56页 |
| 3.5.4 pLH427 | 第56-57页 |
| 3.6 过表达菌株部分 | 第57-61页 |
| 3.6.1 glk/OP筛选 | 第57-58页 |
| 3.6.2 edd/OP筛选 | 第58-59页 |
| 3.6.3 glk_(E.coli)/OP筛选 | 第59-60页 |
| 3.6.4 galP_(E.coli)/OP筛选 | 第60-61页 |
| 3.7 类球红细菌中葡萄糖跨膜转运与代谢的研究 | 第61-65页 |
| 3.7.1 Δglk、ΔfruA、ΔglkΔfruA与WT表型差异 | 第61-62页 |
| 3.7.2 Δglk、ΔfruA、ΔglkΔfruA与WT生长差异 | 第62-63页 |
| 3.7.3 Rsp-2673突变株与WT的表型差异 | 第63-64页 |
| 3.7.4 Rsp-2673敲除菌与WT的摇瓶生长分析 | 第64-65页 |
| 3.8 类球红细菌中葡萄糖跨膜转运与代谢关键基因的荧光定量分析 | 第65-66页 |
| 3.8.1 WT总RNA提取 | 第65-66页 |
| 3.8.2 glk与fruA荧光定量分析 | 第66页 |
| 3.9 类球红细菌中葡萄糖跨膜转运的强化及促进生长研究 | 第66-70页 |
| 3.9.1 Glk代谢研究 | 第66-67页 |
| 3.9.2 ED途径研究 | 第67-68页 |
| 3.9.3 GalP转运蛋白研究 | 第68-70页 |
| 4 结论 | 第70-71页 |
| 4.1 全文总结 | 第70页 |
| 4.2 论文的创新点 | 第70页 |
| 4.3 论文的不足之处 | 第70-71页 |
| 5 展望 | 第71-72页 |
| 6 参考文献 | 第72-79页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第79-80页 |
| 8 致谢 | 第80页 |
