| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 1. 引言 | 第12-33页 |
| 1.1 淀粉、淀粉酶及生淀粉酶简介 | 第12-14页 |
| 1.2 生淀粉酶的应用领域 | 第14-16页 |
| 1.3 研究生淀粉酶的必要性 | 第16页 |
| 1.4 生淀粉酶的国内外研究进展 | 第16-32页 |
| 1.4.1 菌种的选育 | 第16-20页 |
| 1.4.2 培养条件的优化 | 第20-21页 |
| 1.4.3 生淀粉酶合成的调控机理 | 第21-22页 |
| 1.4.4 生淀粉酶的纯化 | 第22-29页 |
| 1.4.5 生淀粉酶的性质 | 第29-30页 |
| 1.4.6 生淀粉酶基因的克隆与表达 | 第30-31页 |
| 1.4.7 生淀粉酶分解生淀粉的机制 | 第31-32页 |
| 1.5 生淀粉酶研究领域目前存在的主要问题 | 第32页 |
| 1.6 本课题的主要研究内容 | 第32-33页 |
| 2. 材料与方法 | 第33-48页 |
| 2.1 实验材料 | 第33页 |
| 2.1.1 菌种和载体 | 第33页 |
| 2.1.2 生化试剂 | 第33页 |
| 2.2 实验仪器 | 第33-34页 |
| 2.3 实验方法 | 第34-48页 |
| 2.3.1 产生淀粉糖化酶菌种的筛选 | 第34-35页 |
| 2.3.2 菌种的鉴定 | 第35-36页 |
| 2.3.3 菌种的诱变 | 第36页 |
| 2.3.4 生淀粉糖化酶基因的克隆、序列分析和功能鉴定 | 第36-38页 |
| 2.3.5 生淀粉糖化酶基因启动子的克隆、序列分析和功能鉴定 | 第38-39页 |
| 2.3.6 creA基因的克隆与序列分析 | 第39页 |
| 2.3.7 不同碳源对F-01和G-11产生淀粉糖化酶的影响 | 第39-40页 |
| 2.3.8 麦芽糖酯对F-01和G-11产生淀粉糖化酶的影响 | 第40页 |
| 2.3.9 RNA干扰creA基因对菌种产生淀粉糖化酶的影响 | 第40-41页 |
| 2.3.10 GR-6产生淀粉糖化酶条件的优化 | 第41-42页 |
| 2.3.11 酶的纯化方法 | 第42页 |
| 2.3.12 酶的性质研究 | 第42-43页 |
| 2.3.13 酶的初步应用研究 | 第43页 |
| 2.3.14 主要测定方法 | 第43-44页 |
| 2.3.15 本研究用到的主要基本操作的方法 | 第44-45页 |
| 2.3.16 本研究中用到的主要培养基 | 第45-47页 |
| 2.3.17 本研究中用到的主要引物 | 第47-48页 |
| 3. 结果与分析 | 第48-112页 |
| 3.1 菌种的筛选 | 第48-49页 |
| 3.1.1 纯种分离 | 第48页 |
| 3.1.2 平板初筛 | 第48页 |
| 3.1.3 摇瓶复筛 | 第48-49页 |
| 3.2 菌种的鉴定 | 第49-52页 |
| 3.2.1 分子鉴定 | 第49-50页 |
| 3.2.2 形态鉴定 | 第50-52页 |
| 3.3 菌种的诱变 | 第52-56页 |
| 3.3.1 紫外线诱变 | 第52-53页 |
| 3.3.2 亚硝基胍诱变 | 第53-54页 |
| 3.3.3 F-01和G-11在淀粉培养基上分泌生淀粉糖化酶的进程曲线 | 第54-56页 |
| 3.4 F-01和G-11生淀粉糖化酶基因的克隆、序列分析和功能鉴定 | 第56-64页 |
| 3.4.1 F-01和G-11生淀粉糖化酶基因的克隆与序列比对 | 第56-59页 |
| 3.4.2 F-01和G-11生淀粉糖化酶基因DNA、cDNA及氨基酸序列的比对 | 第59-61页 |
| 3.4.3 F-01和G-11与其它菌种糖化酶基因的cDNA及氨基酸序列比对 | 第61-63页 |
| 3.4.4 F-01和G-11生淀粉糖化酶基因的功能鉴定 | 第63-64页 |
| 3.5 生淀粉糖化酶基因启动子的克隆、序列分析和功能鉴定 | 第64-66页 |
| 3.5.1 F-01和G-11生淀粉糖化酶基因启动子的克隆与序列分析 | 第64-66页 |
| 3.5.2 F-01和G-11生淀粉糖化酶基因的启动子的功能验证与活性比较 | 第66页 |
| 3.6 F-01和G-11 creA基因的克隆与序列分析 | 第66-70页 |
| 3.7 F-01和G-11生淀粉糖化酶基因和creA相对转录量的比较 | 第70-71页 |
| 3.8 碳源对F-01和G-11产生淀粉糖化酶的影响 | 第71-75页 |
| 3.8.1 碳源对F-01和G-11产生淀粉糖化酶的影响 | 第71-72页 |
| 3.8.2 碳源对F-01和G-11菌体生长的影响 | 第72-73页 |
| 3.8.3 碳源对F-01和G-11生淀粉糖化酶基因转录的影响 | 第73-75页 |
| 3.9 麦芽糖酯对F-01和G-11产生淀粉糖化酶的影响 | 第75-88页 |
| 3.9.1 麦芽糖和麦芽糖酯对F-01和G-1产生淀粉糖化酶的影响 | 第75-76页 |
| 3.9.2 麦芽糖和麦芽糖酯对F-01和G-1菌体生长的影响 | 第76-77页 |
| 3.9.3 麦芽糖和麦芽糖酯对F-01和G-11生淀粉糖化酶转录的影响 | 第77-79页 |
| 3.9.4 麦芽糖酯对F-01和G-11生淀粉糖化酶的诱导机理 | 第79-86页 |
| 3.9.5 麦芽糖酯添加时间对菌种产生淀粉糖化酶的影响 | 第86-87页 |
| 3.9.6 麦芽糖酯浓度对菌种产生淀粉糖化酶的影响 | 第87-88页 |
| 3.10 RNA干扰creA基因对F-01和G-11产生淀粉糖化酶的影响 | 第88-96页 |
| 3.10.1 RNAi对菌株creA相对转录量的影响 | 第88-90页 |
| 3.10.2 RNA干扰creA对菌种产生淀粉糖化酶的影响 | 第90-91页 |
| 3.10.3 RNA干扰creA对菌体生长的影响 | 第91-92页 |
| 3.10.4 RNA干扰creA对生淀粉糖化酶基因相对转录量的影响 | 第92-93页 |
| 3.10.5 RNA干扰菌株的传代稳定性 | 第93-94页 |
| 3.10.6 麦芽糖酯对FR-06和GR-6产生淀粉糖化酶的影响 | 第94-96页 |
| 3.11 GR-6产生淀粉酶培养条件的优化 | 第96-104页 |
| 3.11.1 单因素实验 | 第96-101页 |
| 3.11.2 PB (Plackett-Burman)实验 | 第101-102页 |
| 3.11.3 响应面实验 | 第102-104页 |
| 3.12 酶的纯化 | 第104-107页 |
| 3.12.1 硫酸铵盐析沉淀 | 第104-105页 |
| 3.12.2 DEAE Sepharose Fast Flow阴离子交换层析 | 第105页 |
| 3.12.3 Sephadex G-75凝胶色谱层析 | 第105-107页 |
| 3.13 酶的性质研究 | 第107-110页 |
| 3.13.1 酶的最适合温度和热稳定性 | 第107-108页 |
| 3.13.2 酶的最合适pH和pH稳定性 | 第108-109页 |
| 3.13.3 金属离子对酶活力的影响 | 第109页 |
| 3.13.4 不同底物酶解效果的差异 | 第109页 |
| 3.13.5 酶的水解产物的鉴定 | 第109-110页 |
| 3.14 酶的初步应用研究 | 第110-112页 |
| 4. 讨论 | 第112-122页 |
| 4.1 生淀粉糖化酶产生菌的筛选、鉴定和诱变 | 第112-113页 |
| 4.2 F-01和G-11的生淀粉糖化酶基因、启动子和CREA序列差异 | 第113-114页 |
| 4.2.1 生淀粉糖化酶基因编码区突变与产酶水平提高的关系 | 第113页 |
| 4.2.2 启动子突变与产酶水平提高的关系 | 第113-114页 |
| 4.2.3 F-01和G-11的creA序列比对和转录差异分析 | 第114页 |
| 4.3 生淀粉糖化酶分子中的淀粉结合域结构 | 第114-115页 |
| 4.4 F-01和G-11合成生淀粉酶的过程中的碳源阻遏效应 | 第115-116页 |
| 4.5 麦芽糖酯对F-01和G-11产生淀粉糖化酶的促进作用 | 第116-118页 |
| 4.6 RNA干扰creA对F-01和G-11产生淀粉糖化酶的影响 | 第118页 |
| 4.7 产酶培养条件的优化 | 第118-119页 |
| 4.8 酶的纯化和性质 | 第119-120页 |
| 4.9 生淀粉糖化酶在生料发酵生产酒精中的应用 | 第120-122页 |
| 5. 结论 | 第122-123页 |
| 参考文献 | 第123-135页 |
| 附录 | 第135-138页 |
| 致谢 | 第138页 |
