| 目录 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 名词缩写 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-29页 |
| 1. 白腐菌漆酶 | 第13-20页 |
| ·漆酶的概念 | 第13页 |
| ·漆酶的来源和分布 | 第13页 |
| ·漆酶特性 | 第13-18页 |
| ·漆酶的主要用途 | 第18-20页 |
| 2. 毕赤酵母表达系统 | 第20-23页 |
| ·毕赤酵母表达要素 | 第20-21页 |
| ·影响外源基因在酵母中表达的因素 | 第21-23页 |
| 3. 研究意义 | 第23-24页 |
| 参考文献 | 第24-29页 |
| 第二章 香菇漆酶基因克隆表达及重组漆酶酶学性质 | 第29-47页 |
| 第一节 香菇漆酶基因的克隆表达 | 第30-40页 |
| 1. 材料 | 第30页 |
| ·菌株与质粒 | 第30页 |
| ·试剂 | 第30页 |
| ·培养基与缓冲溶液 | 第30页 |
| ·主要仪器 | 第30页 |
| 2. 方法 | 第30-36页 |
| ·引物设计及扩增香菇漆酶基因 | 第30-32页 |
| ·表达载体pYM8837的构建及转化毕赤酵母 | 第32-33页 |
| ·表达载体pYM8837在大肠杆菌DH5a中扩增 | 第33页 |
| ·毕赤酵母的电击转化 | 第33-34页 |
| ·重组毕赤酵母转化子的鉴定 | 第34页 |
| ·重组毕赤酵母的诱导表达 | 第34页 |
| ·漆酶酶活测定方法 | 第34-35页 |
| ·重组漆酶的纯化和SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析 | 第35-36页 |
| 3. 结果与分析 | 第36-39页 |
| ·香菇漆酶基因的克隆 | 第36-37页 |
| ·重组毕赤酵母载体的构建及酶切鉴定 | 第37-38页 |
| ·重组毕赤酵母转化子的鉴定 | 第38页 |
| ·重组毕赤酵母表达产物SDS-PAGE分析 | 第38-39页 |
| 4. 讨论 | 第39-40页 |
| 第二节 重组漆酶酶学性质 | 第40-47页 |
| 1. 材料 | 第40页 |
| 2. 方法 | 第40-41页 |
| ·酶活的测定方法 | 第40页 |
| ·漆酶最适作用pH测定 | 第40页 |
| ·漆酶的最适反应温度测定 | 第40页 |
| ·酶pH稳定性的测定 | 第40-41页 |
| ·酶对温度的稳定性测定 | 第41页 |
| ·几种金属离子对酶活的影响 | 第41页 |
| ·几种潜在抑制剂对酶活的影响 | 第41页 |
| 3. 结果与分析 | 第41-44页 |
| ·漆酶最适作用pH值和pH稳定性 | 第41-42页 |
| ·漆酶的最适反应温度 | 第42页 |
| ·漆酶的热稳定性研究 | 第42-43页 |
| ·几种金属离子对漆酶活力的影响 | 第43页 |
| ·几种潜在抑制剂对漆酶活性的影响 | 第43-44页 |
| 4. 讨论 | 第44-45页 |
| 5. 本章小结 | 第45-47页 |
| 第三章 重组漆酶摇瓶表达条件的初步研究 | 第47-53页 |
| 1. 材料 | 第48页 |
| ·菌株 | 第48页 |
| ·培养基 | 第48页 |
| ·主要仪器 | 第48页 |
| 2. 方法 | 第48-49页 |
| ·漆酶活性测定方法 | 第48页 |
| ·酵母细胞密度分析 | 第48页 |
| ·种子活化方法 | 第48页 |
| ·漆酶重组酵母的诱导表达实验 | 第48-49页 |
| 3. 结果 | 第49-50页 |
| ·添加不同浓度的甲醇对重组酵母漆酶表达活性的影响 | 第49页 |
| ·添加不同浓度Cu~(2+)对重组酵母漆酶表达活性的影响 | 第49-50页 |
| 4. 讨论 | 第50-51页 |
| 5. 本章小结 | 第51-53页 |
| 第四章 漆酶介体系统脱色三苯甲烷类染料 | 第53-91页 |
| 第一节 重组漆酶对孔雀石绿脱色的研究 | 第54-67页 |
| 1. 材料 | 第54页 |
| ·化学试剂 | 第54页 |
| ·酶及染料 | 第54页 |
| ·实验仪器 | 第54页 |
| 2. 方法 | 第54-55页 |
| ·染料溶液的降解方法 | 第54页 |
| ·染料溶液的脱色分析方法 | 第54页 |
| ·孔雀石绿的最大吸收波长 | 第54页 |
| ·孔雀石绿HPLC分析方法 | 第54-55页 |
| 3. 结果 | 第55-65页 |
| ·纯漆酶与孔雀石绿脱色 | 第55页 |
| ·漆酶ABTS介体体系对孔雀石绿脱色的研究 | 第55-57页 |
| ·自然酚类化合物作为漆酶介体对孔雀石绿脱色的研究 | 第57-60页 |
| ·ABTS、乙酰丁香酮和丁香醛脱色孔雀石绿扫描图 | 第60-61页 |
| ·孔雀石绿降解高效液相色谱分析 | 第61-65页 |
| 4. 讨论 | 第65-67页 |
| 第二节 重组漆酶对结晶紫脱色研究 | 第67-79页 |
| 1. 材料 | 第67页 |
| ·化学试剂 | 第67页 |
| ·酶及染料 | 第67页 |
| ·实验仪器 | 第67页 |
| 2. 方法 | 第67-68页 |
| ·染料溶液的降解方法 | 第67页 |
| ·染料溶液的脱色分析方法 | 第67页 |
| ·结晶紫的最大吸收波长 | 第67页 |
| ·结晶紫HPLC分析方法 | 第67-68页 |
| 3. 结果 | 第68-77页 |
| ·纯漆酶与结晶紫脱色 | 第68页 |
| ·漆酶ABTS介体体系对结晶紫的研究 | 第68-70页 |
| ·自然酚类化合物作为漆酶介体对结晶紫脱色的研究 | 第70-72页 |
| ·ABTS,乙酰丁香酮和丁香醛脱色结晶紫扫描图 | 第72-73页 |
| ·结晶紫降解高效液相色谱分析 | 第73-77页 |
| 4. 讨论 | 第77-79页 |
| 第三节 重组漆酶对亮绿脱色研究 | 第79-91页 |
| 1. 材料 | 第79页 |
| ·化学试剂 | 第79页 |
| ·酶及染料 | 第79页 |
| ·实验仪器 | 第79页 |
| 2. 方法 | 第79页 |
| ·染料溶液的降解方法 | 第79页 |
| ·染料溶液脱色分析方法 | 第79页 |
| ·亮绿的最大吸收波长 | 第79页 |
| ·亮绿HPLC分析方法 | 第79页 |
| 3. 结果 | 第79-88页 |
| ·纯漆酶与亮绿脱色 | 第80页 |
| ·漆酶ABTS介体体系对亮绿的研究 | 第80-82页 |
| ·自然酚类化合物作为漆酶介体对亮绿脱色的研究 | 第82-84页 |
| ·ABTS,乙酰丁香酮和丁香醛脱色亮绿扫描图 | 第84-85页 |
| ·亮绿高效液相色谱分析 | 第85-88页 |
| 4. 讨论 | 第88-89页 |
| 5. 本章小结 | 第89-91页 |
| 全文总结 | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-97页 |
| 附录 | 第97-99页 |
| 致谢 | 第99页 |