| 目录 | 第1-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 符号与缩略语说明 | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-33页 |
| 1 α-半乳糖苷酶的研究进展 | 第13-23页 |
| ·α-半乳糖苷酶的概念 | 第13页 |
| ·α-半乳糖苷酶的分类 | 第13-15页 |
| ·按照最适pH值分类 | 第13-14页 |
| ·按照底物特异性分类 | 第14页 |
| ·按照氨基酸序列分类 | 第14-15页 |
| ·α-半乳糖苷酶的来源 | 第15-18页 |
| ·α-半乳糖苷酶的生理意义 | 第18页 |
| ·α-半乳糖苷酶的酶学性质 | 第18-23页 |
| ·α -半乳糖苷酶的催化特性 | 第19页 |
| ·α-半乳糖苷酶酶活测定方法 | 第19-20页 |
| ·α-半乳糖苷酶的最适反应条件 | 第20-21页 |
| ·α-半乳糖苷酶的分子特性 | 第21-23页 |
| 2 α-半乳糖苷酶的应用 | 第23-27页 |
| ·α-半乳糖苷酶在食品工业上的应用 | 第23-24页 |
| ·α-半乳糖苷酶在制糖工业上的应用 | 第24页 |
| ·α-半乳糖苷酶在饲料工业上的应用 | 第24-25页 |
| ·α-半乳糖苷酶在化学工业上的应用 | 第25页 |
| ·α-半乳糖苷酶在造纸工业上的应用 | 第25页 |
| ·α-半乳糖苷酶的医学研究进展 | 第25-27页 |
| ·α-半乳糖苷酶与Fabry疾病的研究进展 | 第25-26页 |
| ·α-半乳糖苷酶与血型转换的研究进展 | 第26页 |
| ·α-半乳糖苷酶与异种器官移植的研究进展 | 第26-27页 |
| 参考文献 | 第27-33页 |
| 第二章 α-半乳糖苷酶高产菌的筛选、鉴定及其粗酶液的特性研究 | 第33-51页 |
| 1 材料与方法 | 第33-38页 |
| ·培养基与试剂 | 第33页 |
| ·菌株的分离 | 第33页 |
| ·比酶活测定 | 第33-34页 |
| ·菌株MEPE0049的鉴定 | 第34-36页 |
| ·16S rDNA基因的PCR扩增 | 第34-35页 |
| ·测序验证 | 第35页 |
| ·生理生化鉴定 | 第35-36页 |
| ·产酶条件测定 | 第36-37页 |
| ·最适产酶装液量测定 | 第36页 |
| ·最适产酶接种量测定 | 第36页 |
| ·最适产酶碳源测定 | 第36页 |
| ·最适产酶N源测定 | 第36页 |
| ·最适产酶温度测定 | 第36页 |
| ·最适产酶pH测定 | 第36-37页 |
| ·金属离子对产酶的影响 | 第37页 |
| ·粗酶液特性测定 | 第37-38页 |
| ·最适反应pH值测定 | 第37页 |
| ·最适反应温度测定 | 第37页 |
| ·pH值稳定性测定 | 第37-38页 |
| ·热稳定性测定 | 第38页 |
| ·金属离子对酶活的影响 | 第38页 |
| 2 实验结果与分析 | 第38-48页 |
| ·菌种分离 | 第38-39页 |
| ·比酶活的测定 | 第39-40页 |
| ·菌种鉴定 | 第40-41页 |
| ·生理生化鉴定 | 第40页 |
| ·系统发育分析 | 第40-41页 |
| ·巨大芽孢杆菌MEPE0049产酶特性研究 | 第41-45页 |
| ·最适产酶装液量测定 | 第41-42页 |
| ·最适产酶接种量测定 | 第42页 |
| ·最适产酶C源测定 | 第42-43页 |
| ·最适产酶N源测定 | 第43页 |
| ·最适产酶温度测定 | 第43-44页 |
| ·最适产酶pH测定 | 第44-45页 |
| ·金属离子对产酶的影响 | 第45页 |
| ·α-半乳糖苷酶粗酶液酶学性质的研究 | 第45-48页 |
| ·粗酶液最适反应pH值和pH值稳定性 | 第45-46页 |
| ·粗酶液反应的最适温度及温度稳定性 | 第46-47页 |
| ·金属离子对α-半乳糖苷酶活性的影响 | 第47-48页 |
| 3 本章小结与讨论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-51页 |
| 第三章 巨大芽孢杆菌α-半乳糖苷酶基因的克隆、表达、纯化及其酶学性质研究 | 第51-73页 |
| 第一节 巨大芽孢杆菌α-半乳糖苷酶基因的克隆、表达、纯化 | 第51-66页 |
| 1 材料与方法 | 第51-61页 |
| ·菌株和质粒 | 第51页 |
| ·培养条件 | 第51页 |
| ·试剂 | 第51-52页 |
| ·抗生素及使用浓度 | 第52页 |
| ·引物合成 | 第52页 |
| ·表达载体构建 | 第52-58页 |
| ·巨大芽孢杆菌MEPE0049总DNA的提取 | 第53页 |
| ·α-半乳糖苷酶基因的PCR扩增 | 第53-54页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第54页 |
| ·PCR产物加A尾 | 第54-55页 |
| ·酶连 | 第55页 |
| ·感受态的制备(CaCl_2法) | 第55页 |
| ·酶连产物的转化 | 第55-56页 |
| ·质粒DNA的小量提取 | 第56页 |
| ·基因片段的NdeⅠ/XhoⅠ双酶切及纯化 | 第56-57页 |
| ·pET-29a(+)的NdeⅠ/XhoⅠ双酶切及纯化 | 第57页 |
| ·目的基因与pET-29a(+)载体的酶连 | 第57-58页 |
| ·酶连产物的转化和表达菌株的构建 | 第58页 |
| ·表达菌株的活性验证及测序验证 | 第58页 |
| ·α-半乳糖苷酶基因agaB的表达 | 第58-59页 |
| ·α-半乳糖苷酶的纯化 | 第59页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶制备、电泳及凝胶的染色、脱色 | 第59-61页 |
| ·样品的处理 | 第59页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶的灌制 | 第59-60页 |
| ·电泳 | 第60-61页 |
| ·凝胶的染色、脱色 | 第61页 |
| ·α-半乳糖苷酶比酶活力测定 | 第61页 |
| ·硝基苯酚-α-D-半乳糖苷(pNPG)方法 | 第61页 |
| 2 结果与分析 | 第61-66页 |
| ·巨大芽孢杆菌MEPE0049总DNA的提取 | 第61-62页 |
| ·糖苷酶基因的扩增和TA克隆 | 第62-65页 |
| ·α-半乳糖苷酶基因的扩增 | 第62-63页 |
| ·T-A克隆 | 第63页 |
| ·表达载体的构建 | 第63-65页 |
| ·α-半乳糖苷酶基因的表达纯化 | 第65-66页 |
| ·α-半乳糖苷酶AgaB的比酶活的测定 | 第66页 |
| ·硝基苯酚-α-D-半乳糖苷(pNPG)方法 | 第66页 |
| 第二节 α-半乳糖营酶AgaB酶学性质研究 | 第66-71页 |
| 1 材料与方法 | 第66-68页 |
| ·菌株和质粒 | 第66页 |
| ·培养条件 | 第66页 |
| ·温度和pH值对α-半乳糖苷酶AgaB活性及稳定性的影响 | 第66-67页 |
| ·AgaB的最适反应pH值测定 | 第66-67页 |
| ·AgaB的最适反应温度测定 | 第67页 |
| ·AgaB的pH值稳定性测定 | 第67页 |
| ·AgaB的热稳定性测定 | 第67页 |
| ·金属离子对α-半乳糖苷酶AgaB活性的影响 | 第67页 |
| ·α-半乳糖营酶AgaB的米氏常数(Km)和最大反应速率(Vmax) | 第67-68页 |
| 2 结果与分析 | 第68-71页 |
| ·温度和pH值对α-半乳糖苷酶AgaB活性和稳定性的影响 | 第68-71页 |
| ·纯化后酶液反应的最适pH值 | 第68页 |
| ·纯化后酶液反应的pH值稳定性 | 第68-69页 |
| ·纯化后酶液反应的温度稳定性 | 第69-70页 |
| ·金属离子对α-半乳糖苷酶AgaB活性的影响 | 第70页 |
| ·α-半乳糖苷酶AgaB的米氏常数(Km)和最大反应速率(Vmax) | 第70-71页 |
| 本章小结 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-73页 |
| 全文结论 | 第73-75页 |
| 创新之处 | 第75-77页 |
| 附录 | 第77-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
