| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-8页 |
| 第一章 引言 | 第8-16页 |
| ·β-葡聚糖 | 第8页 |
| ·β-1,3-1,4-葡聚糖酶 | 第8-10页 |
| ·β-1,3-1,4-葡聚糖酶的来源 | 第8页 |
| ·β-1,3-1,4-葡聚糖酶的结构与性质 | 第8-9页 |
| ·β-1,3-1,4-葡聚糖酶的应用 | 第9-10页 |
| ·β-1,3-1,4-葡聚糖酶基因的克隆和表达 | 第10页 |
| ·定向进化技术 | 第10-14页 |
| ·定向进化技术简介 | 第10-11页 |
| ·高通量筛选技术 | 第11-13页 |
| ·定向进化技术在生物催化剂改性中的应用 | 第13-14页 |
| ·立题背景和意义 | 第14-15页 |
| ·论文研究思路及研究内容 | 第15-16页 |
| ·论文研究思路 | 第15页 |
| ·论文研究内容 | 第15-16页 |
| 第二章 材料与方法 | 第16-24页 |
| ·实验材料 | 第16-17页 |
| ·菌株和载体 | 第16页 |
| ·试剂 | 第16页 |
| ·主要仪器 | 第16-17页 |
| ·课题相关培养基 | 第17页 |
| ·引物序列和测序 | 第17页 |
| ·方法 | 第17-24页 |
| ·β-1,3-1,4-葡聚糖酶的表达 | 第17-18页 |
| ·分子生物学基本操作 | 第18-20页 |
| ·主要分析方法 | 第20-21页 |
| ·热稳定性提高酶蛋白变种高通量筛选模型的建立 | 第21-22页 |
| ·易错PCR 技术介导的β-葡聚糖酶热稳定性定向进化 | 第22页 |
| ·四引物PCR 技术介导的β-葡聚糖酶定点突变 | 第22-24页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第24-36页 |
| ·热稳定性提高酶蛋白变种高通量筛选模型的建立 | 第24-27页 |
| ·IPTG 及乳糖对96-微孔板中β-葡聚糖酶表达量的影响 | 第24页 |
| ·IPTG 添加量对96-微孔板中β-葡聚糖酶表达量的影响 | 第24-25页 |
| ·乳糖添加量对96-微孔板中β-葡聚糖酶表达量的影响 | 第25页 |
| ·诱导时间对96-微孔板中β-葡聚糖酶表达量的影响 | 第25页 |
| ·96-微孔板中β-葡聚糖酶粗酶液热钝化温度的选择 | 第25-26页 |
| ·高通量筛选方法的建立 | 第26-27页 |
| ·高通量筛选方法的统计学分析 | 第27页 |
| ·易错PCR 技术介导的β-葡聚糖酶热稳定性定向进化 | 第27-33页 |
| ·易错PCR 反应条件的优化 | 第27-28页 |
| ·突变体文库的构建及突变株的筛选和鉴定 | 第28-30页 |
| ·热稳定性提高变体及野生型β-1, 3-1, 4-葡聚糖酶的分离纯化 | 第30页 |
| ·野生酶和热稳定性提高突变体的Michaelis-Menten 动力学分析 | 第30-31页 |
| ·野生酶和热稳定性提高的突变酶的热稳定性测定 | 第31-32页 |
| ·热稳定性提高β-葡聚糖酶变体耐热机理分析 | 第32-33页 |
| ·四引物PCR 技术介导的β-葡聚糖酶定点突变 | 第33-36页 |
| ·基于生物信息学方法的β-葡聚糖酶模拟突变及分子能量计算 | 第33页 |
| ·突变体的构建与转化 | 第33-34页 |
| ·突变体的表达、纯化及热稳定性参数的测定 | 第34页 |
| ·β-1, 3-1, 4-葡聚糖酶的三维结构同源模拟及突变体耐热机理分析 | 第34-36页 |
| 结论与展望 | 第36-38页 |
| 致谢 | 第38-40页 |
| 参考文献 | 第40-43页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第43页 |
