| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 前言 | 第8-17页 |
| ·琥珀酸的理化性质 | 第8页 |
| ·琥珀酸的功能用途与市场分析 | 第8-9页 |
| ·琥珀酸的生产方法 | 第9-10页 |
| ·化学合成法 | 第9-10页 |
| ·生物转化法 | 第10页 |
| ·微生物发酵法 | 第10页 |
| ·发酵法产琥珀酸的研究现状及国内外最新进展 | 第10-15页 |
| ·产琥珀酸厌氧螺菌的研究进展 | 第11-12页 |
| ·产琥珀酸放线杆菌的研究进展 | 第12页 |
| ·大肠杆菌产琥珀酸的研究进展 | 第12-15页 |
| ·代谢工程与基因敲除技术 | 第15-16页 |
| ·本论文的研究意义与研究内容 | 第16-17页 |
| 第二章 材料与方法 | 第17-21页 |
| ·材料 | 第17-19页 |
| ·菌株与质粒 | 第17页 |
| ·工具酶和试剂 | 第17页 |
| ·引物 | 第17-18页 |
| ·染色体与质粒提取试剂 | 第18页 |
| ·培养基和培养条件 | 第18页 |
| ·主要仪器和设备 | 第18-19页 |
| ·方法 | 第19-21页 |
| ·大肠杆菌质粒DNA 的提取 | 第19页 |
| ·大肠杆菌JM109 感受态细胞的制备及转化 | 第19-20页 |
| ·目标基因的删除 | 第20页 |
| ·重组大肠杆菌在发酵罐中发酵实验 | 第20页 |
| ·发酵产物检测 | 第20页 |
| ·其他细胞培养及分子操作 | 第20-21页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第21-41页 |
| ·E. coli CICIM B0013 琥珀酸合成途径竞争途径的阻断 | 第21-26页 |
| ·乳酸脱氢酶基因(ldhA)的敲除 | 第21-22页 |
| ·丙酮酸甲酸裂解酶基因(pflB)的敲除 | 第22-23页 |
| ·乙醇脱氢酶基因(adhE)的敲除 | 第23-24页 |
| ·重组菌E. coli B0013-1040 的生理特性研究 | 第24-25页 |
| ·重组菌E. coli B0013-1040 的发酵特性研究 | 第25-26页 |
| ·大肠杆菌磷酸转移酶系统(PTS)的改造 | 第26-32页 |
| ·ptsG 基因的敲除 | 第27-30页 |
| ·重组菌E. coli B0013-1050 的生理特性研究 | 第30-31页 |
| ·重组菌E. coli B0013-1050 的发酵特性研究 | 第31-32页 |
| ·琥珀酸合成途径的强化 | 第32-36页 |
| ·重组质粒pUC19-ppc 的构建 | 第32-33页 |
| ·重组质粒pBR322-ppc 的构建 | 第33-34页 |
| ·重组质粒pTH-ppc 的构建 | 第34-35页 |
| ·带有不同拷贝数质粒重组菌株的生理特性和发酵性能研究 | 第35-36页 |
| ·构建大肠杆菌厌氧发酵产琥珀酸的乙醛酸循环 | 第36-41页 |
| ·iclR 基因的敲除 | 第37-39页 |
| ·重组菌E. coli B0013-1060(pTH-ppc)的发酵特性研究 | 第39-41页 |
| 论文结论与展望 | 第41-43页 |
| 致谢 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-48页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第48页 |
