| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第8-18页 |
| 1.1 γ-谷氨酰胺转肽酶(GGT)的概述 | 第8-11页 |
| 1.1.1 GGT 的来源及分布 | 第8页 |
| 1.1.2 GGT 的催化性质 | 第8-9页 |
| 1.1.3 GGT 的结构 | 第9-10页 |
| 1.1.4 GGT 的制备 | 第10页 |
| 1.1.5 GGT 的应用前景 | 第10-11页 |
| 1.2 L-茶氨酸概述 | 第11-16页 |
| 1.2.1 L-茶氨酸的发现及分布 | 第11页 |
| 1.2.2 L-茶氨酸的理化特性 | 第11-12页 |
| 1.2.3 L-茶氨酸的生理功能及应用前景 | 第12-14页 |
| 1.2.4 L-茶氨酸的制备方法 | 第14-16页 |
| 1.3 本课题立题依据和意义 | 第16-17页 |
| 1.4 本课题主要研究内容 | 第17-18页 |
| 第二章 材料和方法 | 第18-26页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-19页 |
| 2.1.1 菌种和质粒 | 第18页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第18页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第18页 |
| 2.1.4 培养基 | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-21页 |
| 2.2.1 pET-20b(+)-ggt 重组质粒的构建 | 第19-21页 |
| 2.2.2 ggt 基因在 E. coli BL21(DE3)中的表达 | 第21页 |
| 2.3 分析方法 | 第21-26页 |
| 2.3.1 菌体细胞干重的测定 | 第21页 |
| 2.3.2 蛋白浓度的测定 | 第21页 |
| 2.3.3 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第21-22页 |
| 2.3.4 GGT 酶活力的测定 | 第22页 |
| 2.3.5 重组 GGT 的性质鉴定 | 第22-24页 |
| 2.3.6 酶法合成 L-茶氨酸的工艺 | 第24页 |
| 2.3.7 L-茶氨酸的检测及鉴定 | 第24-26页 |
| 第三章 结果和讨论 | 第26-49页 |
| 3.1 B. subtilis 168 GGT 在 E. coli BL21(DE3)中的克隆表达 | 第26-28页 |
| 3.1.1 重组表达载体 pET-20b(+)-ggt 的构建 | 第26-27页 |
| 3.1.2 重组菌 E. coli BL21(DE3)/pET-20b(+)-ggt 的诱导表达 | 第27-28页 |
| 3.2 重组GGT的分离纯化和性质研究 | 第28-33页 |
| 3.2.1 重组 GGT 的分离纯化 | 第29页 |
| 3.2.2 重组 GGT 的酶学性质 | 第29-33页 |
| 3.3 重组大肠杆菌产B. subtilis 168 GGT的摇瓶发酵优化 | 第33-43页 |
| 3.3.1 重组菌生长及产酶曲线 | 第33-34页 |
| 3.3.2 重组菌发酵培养条件优化 | 第34-37页 |
| 3.3.3 重组菌发酵培养基成分的优化 | 第37-42页 |
| 3.3.4 添加甘氨酸对重组菌产酶的影响 | 第42-43页 |
| 3.4 重组 GGT 酶法合成 L-茶氨酸影响因素的研究 | 第43-49页 |
| 3.4.1 反应 pH 对 L-茶氨酸合成的影响 | 第43-44页 |
| 3.4.2 底物 L-Gln 与乙胺的配比(L-Gln:乙胺)对 L-茶氨酸合成的影响 | 第44-45页 |
| 3.4.3 反应温度对 L-茶氨酸合成的影响 | 第45-46页 |
| 3.4.4 底物浓度对 L-茶氨酸合成的影响 | 第46-47页 |
| 3.4.5 转化产物的质谱鉴定(UPLC-Q-TOF MS) | 第47-49页 |
| 主要结论与展望 | 第49-51页 |
| 主要结论 | 第49页 |
| 展望 | 第49-51页 |
| 致谢 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-57页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第57页 |
