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细菌β-淀粉酶异源表达及碳分解代谢物阻遏的研究

摘要第3-5页
Abstract第5-6页
第一章 绪论第9-18页
    1.1 β-淀粉酶概述第9-11页
        1.1.1 淀粉酶的定义及分类第9页
        1.1.2 β-淀粉酶的简介第9-10页
        1.1.3 β-淀粉酶的应用第10页
        1.1.4 β-淀粉酶的生产第10-11页
    1.2 异源表达系统第11-12页
        1.2.1 大肠杆菌表达系统第11页
        1.2.2 枯草芽孢杆菌表达系统第11-12页
        1.2.3 地衣芽孢杆菌表达系统第12页
    1.3 微生物碳分解代谢物阻遏第12-16页
        1.3.1 细菌的PTS转运机制第13-14页
        1.3.2 革兰氏阴性菌的CCR机制第14页
        1.3.3 革兰氏阳性菌的CCR机制第14-16页
        1.3.4 碳代谢去阻遏的方法第16页
    1.4 立题意义与研究内容第16-18页
        1.4.1 立题意义第16-17页
        1.4.2 研究内容第17-18页
第二章 材料与方法第18-24页
    2.1 实验材料第18-20页
        2.1.1 质粒和菌株第18-19页
        2.1.2 引物第19页
        2.1.3 主要工具酶及试剂第19页
        2.1.4 培养基第19-20页
        2.1.5 仪器设备第20页
    2.2 实验方法第20-24页
        2.2.1 细菌基因组DNA提取第20页
        2.2.2 目的片段PCR扩增第20-21页
        2.2.3 重组质粒的构建第21页
        2.2.4 细菌感受态的制备及转化方法第21页
        2.2.5 重组菌株的构建第21页
        2.2.6 重组菌株的诱导发酵及重组β-淀粉酶粗酶液的制备第21-22页
        2.2.7 重组β-淀粉酶酶活力的测定第22页
        2.2.8 蛋白含量测定及SDS-PAGE电泳第22页
        2.2.9 重组β-淀粉酶的纯化第22页
        2.2.10 重组枯草芽孢杆菌产β-淀粉酶发酵优化第22-24页
第三章 结果与讨论第24-41页
    3.1 B.megatheriumβ-淀粉酶的异源表达第24-28页
        3.1.1 木糖诱导启动子和β-淀粉酶基因的克隆与分析第24页
        3.1.2 重组表达质粒的构建第24-26页
        3.1.3 重组β-淀粉酶的异源表达分析第26-28页
    3.2 重组β-淀粉酶酶学性质的研究第28-31页
        3.2.1 重组β-淀粉酶的纯化第28-29页
        3.2.2 温度对重组β-淀粉酶活力和稳定性的影响第29页
        3.2.3 pH对重组β-淀粉酶活力和稳定性的影响第29-30页
        3.2.4 金属离子对重组β-淀粉酶活性的影响第30-31页
        3.2.5 重组β-淀粉酶的底物特异性第31页
    3.3 重组β-淀粉酶碳分解代谢物阻遏的研究第31-41页
        3.3.1 携带突变型amyM-CRE重组菌株的构建第31-32页
        3.3.2 突变amyM-CRE对重组菌表达β-淀粉酶的影响第32-34页
        3.3.3 重组菌株BAXMH4发酵培养基组分优化第34-37页
        3.3.4 重组菌株BAXMH4诱导发酵条件优化第37-39页
        3.3.5 重组菌株BAXMH4摇瓶发酵过程分析第39-41页
主要结论与展望第41-43页
致谢第43-44页
参考文献第44-49页
附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文第49页

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