| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 缩略语表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-18页 |
| 1.1 阪崎肠杆菌的流行现状与特征 | 第12-13页 |
| 1.1.1 阪崎肠杆菌的流行现状 | 第12页 |
| 1.1.2 阪崎肠杆菌的生理生化特征 | 第12-13页 |
| 1.2 阪崎肠杆菌检测方法及研究现状 | 第13-15页 |
| 1.2.1 生化检测方法 | 第13-14页 |
| 1.2.2 分子检测法 | 第14-15页 |
| 1.2.3 免疫学检测法 | 第15页 |
| 1.3 胶体金 | 第15-17页 |
| 1.3.1 胶体金的特性 | 第15页 |
| 1.3.2 胶体金的应用 | 第15-17页 |
| 1.4 脂多糖 | 第17页 |
| 1.5 本研究的目的意义 | 第17-18页 |
| 第二章 阪崎肠杆菌多克隆抗体的制备及纯化 | 第18-26页 |
| 2.1 材料 | 第18-20页 |
| 2.1.1 菌株来源 | 第18页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第18页 |
| 2.1.3 培养基 | 第18页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第18页 |
| 2.1.5 主要仪器 | 第18-19页 |
| 2.1.6 ELISA试剂的配制 | 第19页 |
| 2.1.7 Bradford试剂的配制 | 第19页 |
| 2.1.8 SDS-PAGE缓冲液的配制 | 第19-20页 |
| 2.1.9 动物饲养与处理 | 第20页 |
| 2.2 方法 | 第20-22页 |
| 2.2.1 免疫抗原的制备 | 第20页 |
| 2.2.2 免疫方案 | 第20-21页 |
| 2.2.3 间接ELISA检测抗体效价 | 第21页 |
| 2.2.4 多克隆抗体的纯化与鉴定 | 第21-22页 |
| 2.3 结果与分析 | 第22-24页 |
| 2.3.1 多克隆抗体的产生进程(曲线) | 第22-23页 |
| 2.3.2 间接ELISA检测多克隆抗体的效价 | 第23页 |
| 2.3.3 多克隆抗体蛋白质含量的测定 | 第23-24页 |
| 2.3.4 多克隆抗体纯度及分子量的测定 | 第24页 |
| 2.4 讨论 | 第24-25页 |
| 2.4.1 抗原制备对多抗制备的影响 | 第24页 |
| 2.4.2 免疫剂量的选择 | 第24-25页 |
| 2.4.3 纯化后的抗体效价 | 第25页 |
| 2.4.4 多抗的特异性 | 第25页 |
| 2.5 小结 | 第25-26页 |
| 第三章 阪崎肠杆菌脂多糖的提取纯化及初步结构分析 | 第26-34页 |
| 3.1 实验材料 | 第26-27页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第26页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第26-27页 |
| 3.2 透析袋的处理 | 第27页 |
| 3.3 脂多糖的提取纯化 | 第27-28页 |
| 3.3.1 菌悬液的制备 | 第27页 |
| 3.3.2 热酚法粗脂多糖的提取 | 第27页 |
| 3.3.3 超声波破碎法粗脂多糖的提取 | 第27页 |
| 3.3.4 粗脂多糖的提纯 | 第27页 |
| 3.3.5 多糖含量的测定 | 第27-28页 |
| 3.3.6 产率的测定 | 第28页 |
| 3.3.7 蛋白含量的测定 | 第28页 |
| 3.3.8 核酸含量的测定 | 第28页 |
| 3.4 外光谱测定脂多糖官能团 | 第28-29页 |
| 3.5 用ELISA法检测脂多糖的抗原特异性 | 第29-30页 |
| 3.6 结果与分析 | 第30-32页 |
| 3.6.1 热酚法多次抽提的结果 | 第30页 |
| 3.6.2 两种方法纯化后的脂多糖产率 | 第30-31页 |
| 3.6.3 LPS多糖含量 | 第31页 |
| 3.6.4 脂多糖的红外光谱图 | 第31页 |
| 3.6.5 脂多糖的特异性分析 | 第31-32页 |
| 3.7 讨论 | 第32-33页 |
| 3.7.1 脂多糖的抗原性 | 第32页 |
| 3.7.2 纯化的方法 | 第32页 |
| 3.7.3 核酸的去除 | 第32页 |
| 3.7.4 抽提的次数 | 第32-33页 |
| 3.8 小结 | 第33-34页 |
| 第四章 胶体金溶液的制备条件优化 | 第34-40页 |
| 4.1 材料 | 第34页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第34页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第34页 |
| 4.1.3 容器的准备和溶液的配制 | 第34页 |
| 4.2 方法 | 第34-36页 |
| 4.2.1 胶体金的制备 | 第34-35页 |
| 4.2.2 胶体金制备的条件优化 | 第35-36页 |
| 4.3 检测胶体金溶液质量的方法 | 第36页 |
| 4.3.1 目测 | 第36页 |
| 4.3.2 紫外扫描检测 | 第36页 |
| 4.4 结果与分析 | 第36-38页 |
| 4.4.1 不同加热时间胶体金溶液的紫外吸收光谱 | 第36-37页 |
| 4.4.2 不同温度下胶体金溶液的紫外吸收光谱 | 第37页 |
| 4.4.3 不同pH条件下胶体金溶液的紫外吸收光谱 | 第37-38页 |
| 4.4.4 不同转速下胶体金溶液的紫外吸收光谱 | 第38页 |
| 4.5 讨论 | 第38-39页 |
| 4.5.1 转速对胶体金溶液的影响 | 第38页 |
| 4.5.2 沸腾后加热时间对胶体金溶液的影响 | 第38-39页 |
| 4.5.3 温度对胶体金溶液的影响 | 第39页 |
| 4.6 小结 | 第39-40页 |
| 第五章 金标抗体偶联最佳配方的选择 | 第40-45页 |
| 5.1 材料 | 第40页 |
| 5.1.1 主要试剂 | 第40页 |
| 5.1.2 主要仪器 | 第40页 |
| 5.1.3 容器的准备和溶液的配制 | 第40页 |
| 5.2 方法 | 第40-42页 |
| 5.2.1 最佳蛋白浓度的确定 | 第40-41页 |
| 5.2.2 最佳pH值的确定 | 第41页 |
| 5.2.3 金标探针复合物的制备 | 第41页 |
| 5.2.4 金标抗体稀释液缓冲体系的选择 | 第41页 |
| 5.2.5 糖对金标抗体稳定性的影响 | 第41-42页 |
| 5.3 结果与分析 | 第42-44页 |
| 5.3.1 最佳蛋白浓度的确定 | 第42页 |
| 5.3.2 最佳pH的确定 | 第42-43页 |
| 5.3.3 最佳缓冲液的确定 | 第43页 |
| 5.3.4 最佳蔗糖浓度的确定 | 第43-44页 |
| 5.4 讨论 | 第44页 |
| 5.4.1 pH对金标抗体稳定性的影响 | 第44页 |
| 5.4.2 蔗糖浓度对金标抗体稳定性的影响 | 第44页 |
| 5.5 小结 | 第44-45页 |
| 第六章 阪崎肠杆菌免疫层析试纸条的制备及研究 | 第45-53页 |
| 6.1 材料 | 第45页 |
| 6.1.1 主要试剂和试纸条材料 | 第45页 |
| 6.1.2 免疫层析试剂的配制 | 第45页 |
| 6.2 方法 | 第45-47页 |
| 6.2.1 免疫层析试纸条各组分的前处理和制备(taole et al.,2013) | 第45-46页 |
| 6.2.2 免疫层析试纸条的组装 | 第46页 |
| 6.2.3 胶体金试纸条的判定标准 | 第46-47页 |
| 6.2.4 试纸条的检测限 | 第47页 |
| 6.2.5 试纸条的特异性 | 第47页 |
| 6.2.6 试纸条的稳定性 | 第47页 |
| 6.2.7 以脂多糖作为抗原测试试纸条的检测限 | 第47页 |
| 6.3 结果与分析 | 第47-51页 |
| 6.3.1 试纸条检测限分析 | 第47-48页 |
| 6.3.2 以脂多糖为抗原的试纸条检测限分析 | 第48-49页 |
| 6.3.3 试纸条重复性分析 | 第49页 |
| 6.3.4 试纸条的特异性 | 第49-51页 |
| 6.4 讨论 | 第51-52页 |
| 6.4.1 硝酸纤维素膜的干燥 | 第51页 |
| 6.4.2 抗体的浓度选择 | 第51-52页 |
| 6.4.3 测试线点样位置 | 第52页 |
| 6.4.4 脂多糖的灵敏度 | 第52页 |
| 6.4.5 属外抗原的选择 | 第52页 |
| 6.5 小结 | 第52-53页 |
| 第七章 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-62页 |
| 致谢 | 第62页 |