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高产雄甾-4-烯-3,17-二酮新金色分枝杆菌的选育及发酵条件优化

摘要第1-4页
Abstract第4-8页
第一章 绪论第8-17页
   ·甾体药物研究进展第8-10页
     ·甾体化合物概述第8页
     ·甾体药物概述第8-9页
     ·国内外甾体药物的发展现状第9-10页
   ·雄甾烯酮概述第10-13页
     ·雄甾烯酮的理化性质第10页
     ·微生物降解植物甾醇为雄甾烯酮机理研究第10-12页
     ·雄甾烯酮的研究现状第12-13页
   ·菌种选育方法概述第13-14页
     ·传统诱变育种方法第13页
     ·常压室温等离子体(ARTP)诱变方法介绍第13-14页
     ·目的菌株筛选方法介绍第14页
   ·蛋白质组学第14-15页
     ·蛋白质组学简介第14页
     ·蛋白质组学主要研究技术第14-15页
   ·立题意义第15页
   ·本课题主要的研究内容第15-17页
第二章 材料与方法第17-28页
   ·实验材料第17-22页
     ·实验仪器第17页
     ·主要试剂第17-18页
     ·菌株与质粒第18页
     ·培养基和培养条件及其优化第18-19页
     ·PCR引物设计以及ksdd序列测定第19-21页
     ·主要溶液的配制第21-22页
   ·实验方法第22-28页
     ·ARTP诱变新金色分枝杆菌(Mycobacterium neoaurum ZAD)第22页
     ·高产AD菌株的快速筛选第22-24页
     ·诱变菌株遗传稳定性验证第24页
     ·M. neoaurum ZADF-4 降解植物甾醇的 2-DE分析第24-26页
     ·目的蛋白的质谱鉴定第26页
     ·qPCR检测差异蛋白的转录水平第26-28页
第三章 结果与讨论第28-47页
   ·ARTP诱变致死率曲线的绘制第28页
   ·高产AD诱变菌株的快速筛选第28-32页
     ·滤膜初筛第28-29页
     ·KSDD酶活测定和摇瓶复筛第29-31页
     ·ksdd基因序列比对与KSDD氨基酸序列分析第31页
     ·变异菌株M. neoaurum ZADF-4 的遗传稳定性研究第31-32页
   ·M. neoaurum ZADF-4 发酵培养条件优化第32-41页
     ·不同碳源对M. neoaurum ZADF-4 的影响第32-33页
     ·葡萄糖浓度梯度优化实验第33-34页
     ·不同氮源对M. neoaurum ZADF-4 的影响第34页
     ·大豆蛋白胨浓度梯度优化实验第34-35页
     ·不同底物浓度对M. neoaurum ZADF-4 中AD产量的影响第35-36页
     ·K2HPO4对变异菌株M. neoaurum ZADF-4 生长及AD产量的影响第36页
     ·MgSO4浓度对变异菌株M. neoaurum ZADF-4 生长和AD产量的影响第36-37页
     ·MnCl2浓度对变异菌株M. neoaurum ZADF-4 生长和AD产量的影响第37页
     ·正交优化培养基组分第37-38页
     ·助溶剂与底物浓度比对M. neoaurum ZADF-4 中AD产量的影响第38-39页
     ·温度对变异菌株M. neoaurum ZADF-4 生长和AD产量的影响第39-40页
     ·接种量对变异菌株M. neoaurum ZADF-4 生长和AD产量的影响第40页
     ·转速对变异菌株M. neoaurum ZADF-4 生长和AD产量的影响第40-41页
     ·变异菌株M. neoaurum ZADF-4 的 5 L发酵罐实验第41页
   ·M. neoaurum ZADF-4 添加植物甾醇与否两种条件下的蛋白组学研究第41-47页
     ·添加植物甾醇与否两种条件下M. neoaurum ZADF-4 全细胞蛋白的 2-DE图谱分析第41-44页
     ·显著差异蛋白的质谱鉴定第44页
     ·差异蛋白功能分析第44-45页
     ·关键差异蛋白定量PCR验证以及与其他转录组实验结果比较第45-47页
主要结论与展望第47-49页
 主要结论第47页
 展望第47-49页
致谢第49-50页
参考文献第50-54页
附录I:作者在攻读硕士学位期间发表的论文第54-55页
附录II:出发菌株与变异菌株的ksdd基因序列第55-56页

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