| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第一章 绪论 | 第9-18页 |
| ·甾体药物及其合成方法 | 第9-12页 |
| ·甾体化合物 | 第9页 |
| ·甾体药物 | 第9-10页 |
| ·甾体药物的合成方法 | 第10-12页 |
| ·微生物转化甾醇的机制 | 第12-14页 |
| ·可转化甾醇的微生物 | 第12页 |
| ·微生物转化甾醇的分子机制 | 第12-14页 |
| ·甾体药物中间体——雄甾4烯-3,17-二酮和雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮 | 第14-16页 |
| ·雄甾4烯-3,17-二酮和雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮简介 | 第14-15页 |
| ·微生物转化甾醇合成AD和ADD的研究进展 | 第15-16页 |
| ·分枝杆菌表达载体 | 第16-17页 |
| ·立题意义 | 第17页 |
| ·本课题的主要研究内容 | 第17-18页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第18-27页 |
| ·实验材料 | 第18-21页 |
| ·主要仪器 | 第18页 |
| ·菌株及质粒 | 第18-20页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·引物 | 第20页 |
| ·培养基及培养条件 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-27页 |
| ·分枝杆菌基因组DNA的提取 | 第21页 |
| ·PCR体系及条件 | 第21页 |
| ·PCR产物纯化及连接T载体 | 第21-22页 |
| ·重组质粒的构建 | 第22页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备及转化方法 | 第22页 |
| ·重组新金色分枝杆菌的构建及诱导表达 | 第22-23页 |
| ·酶活测定方法 | 第23-24页 |
| ·12% SDS-PAGE | 第24页 |
| ·重组新金色分枝杆菌的稳定性分析 | 第24-25页 |
| ·GFP的荧光检测 | 第25页 |
| ·重组新金色分枝杆菌的全细胞转化 | 第25页 |
| ·重组新金色分枝杆菌的发酵及参数测定 | 第25-26页 |
| ·底物及产物的检测方法 | 第26-27页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第27-49页 |
| ·利用载体pMF41 在新金色分枝杆菌加强表达甾醇降解关键酶 | 第27-33页 |
| ·重组载体pMF41-choM1、pMF41-choM2 和pMF41-ksdd的构建 | 第27-29页 |
| ·重组新金色分枝杆菌的构建及筛选 | 第29页 |
| ·重组新金色分枝杆菌的酶活测定 | 第29-31页 |
| ·重组新金色分枝杆菌的稳定性分析 | 第31-32页 |
| ·重组新金色分枝杆菌的摇瓶发酵 | 第32-33页 |
| ·新型新金色分枝杆菌表达载体的构建及其启动子优化 | 第33-45页 |
| ·新型新金色分枝杆菌表达载体pMTac的构建 | 第33-34页 |
| ·表达载体pMTac在新金色分枝杆菌M. neoaurum JC-12 中的功能验证 | 第34-38页 |
| ·表达载体pMTac启动子序列的优化 | 第38-45页 |
| ·3-甾酮-△1-脱氢酶和胆固醇氧化酶在新金色分枝杆菌中共表达 | 第45-49页 |
| ·共表达载体pMTac-ksdd-choM2 的构建 | 第45页 |
| ·重组新金色分枝杆菌M. neoaurum JC-12 的构建及筛选 | 第45页 |
| ·重组新金色分枝杆菌M. neoaurum JC-12 的KSDD和ChoM酶活的测定 | 第45-46页 |
| ·重组菌M. neoaurum JC-12/pMTac2ksdd-choM2 生长曲线的测定 | 第46-47页 |
| ·重组菌M. neoaurum JC-12/pMTac2ksdd-choM2 的 5 L发酵罐发酵 | 第47-49页 |
| 主要结论与展望 | 第49-51页 |
| 主要结论 | 第49页 |
| 展望 | 第49-51页 |
| 致谢 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-57页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第57页 |
