| 目录 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 英文缩略语 | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 文献综述 | 第14-32页 |
| 1 阪崎肠杆菌(克罗诺杆菌属) | 第14-17页 |
| ·命名与分类 | 第14页 |
| ·生理生化特性 | 第14-15页 |
| ·热和渗透压抗性 | 第15页 |
| ·流行病学 | 第15-17页 |
| ·污染源 | 第16页 |
| ·阪崎肠杆菌危害 | 第16页 |
| ·致病机制 | 第16-17页 |
| 2 阪崎肠杆菌检测方法研究进展 | 第17-23页 |
| ·传统培养检测方法 | 第17页 |
| ·分子生物学检测方法 | 第17-23页 |
| ·普通PCR | 第18-20页 |
| ·荧光定量PCR | 第20-22页 |
| ·环介导恒温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP) | 第22页 |
| ·探针方法 | 第22-23页 |
| 3 扩增内标(Internal Amplification Control,IAC) | 第23-25页 |
| ·扩增内标的种类 | 第23-24页 |
| ·扩增内标构建的方法 | 第24页 |
| ·扩增内标在食源性致病菌PCR检测体系中的应用 | 第24-25页 |
| 参考文献 | 第25-32页 |
| 第一章 阪崎肠杆菌(克罗诺杆菌属)常规双重PCR检测方法的建立 | 第32-48页 |
| 1 材料与方法 | 第32-39页 |
| ·试验材料 | 第32-35页 |
| ·菌株 | 第32-34页 |
| ·培养基、试剂与样品 | 第34页 |
| ·仪器与设备 | 第34-35页 |
| ·试验方法 | 第35-39页 |
| ·细菌培养 | 第35页 |
| ·细菌基因组DNA提取 | 第35页 |
| ·DNA浓度及纯度测定 | 第35-36页 |
| ·模板稀释 | 第36页 |
| ·引物设计 | 第36页 |
| ·PCR反应与电泳检测 | 第36-37页 |
| ·特异性检测 | 第37-38页 |
| ·灵敏性检测 | 第38页 |
| ·模拟污染样品检测 | 第38-39页 |
| ·抗干扰能力检验 | 第39页 |
| 2 结果与分析 | 第39-44页 |
| ·单重PCR反应 | 第39-40页 |
| ·PCR克隆产物鉴定 | 第40-41页 |
| ·PCR鉴定 | 第40页 |
| ·测序鉴定 | 第40-41页 |
| ·双重PCR检测体系 | 第41-44页 |
| ·双重PCR反应体系和条件优化 | 第41页 |
| ·特异性检测 | 第41-42页 |
| ·纯菌灵敏性检测 | 第42页 |
| ·人工模拟污染样品检测 | 第42-43页 |
| ·抗干扰能力检验 | 第43-44页 |
| 3 讨论 | 第44-45页 |
| 4 本章小结 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-48页 |
| 第二章 含有扩增内标的阪崎肠杆菌(克罗诺杆菌属)荧光定量PCR检测方法的建立 | 第48-70页 |
| 1 材料与方法 | 第48-55页 |
| ·试验材料 | 第48-49页 |
| ·菌株和质粒 | 第48-49页 |
| ·培养基 | 第49页 |
| ·试验试剂 | 第49页 |
| ·仪器与设备 | 第49页 |
| ·试验方法 | 第49-55页 |
| ·细菌培养及DNA提取 | 第49-50页 |
| ·扩增内标的构建 | 第50-52页 |
| ·Real-time PCR反应体系优化 | 第52-54页 |
| ·特异性检测 | 第54页 |
| ·灵敏性检测 | 第54页 |
| ·模拟污染样品检测 | 第54-55页 |
| ·抗干扰能力检验 | 第55页 |
| 2 结果与分析 | 第55-63页 |
| ·扩增内标的构建 | 第55-56页 |
| ·扩增内标PCR扩增 | 第55页 |
| ·扩增内标鉴定 | 第55-56页 |
| ·内标序列组成 | 第56页 |
| ·Real-time PCR反应体系的建立 | 第56-59页 |
| ·引物、探针浓度的优化 | 第56-58页 |
| ·内标DNA模板浓度优化 | 第58-59页 |
| ·Real-time PCR反应体系 | 第59页 |
| ·特异性验证 | 第59-60页 |
| ·灵敏度评价 | 第60-62页 |
| ·人工模拟污染样品real-time PCR检测 | 第62页 |
| ·抗干扰能力评价 | 第62-63页 |
| 3 讨论 | 第63-64页 |
| 4 本章小结 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-70页 |
| 第三章 阪崎肠杆菌(克罗诺杆菌属)快速检测方法的应用 | 第70-82页 |
| 1 材料与方法 | 第70-74页 |
| ·试验材料 | 第70-71页 |
| ·培养基 | 第70-71页 |
| ·试验试剂 | 第71页 |
| ·试验样品 | 第71页 |
| ·仪器与设备 | 第71页 |
| ·试验方法 | 第71-74页 |
| ·传统检测方法 | 第71-73页 |
| ·快速检测方法 | 第73-74页 |
| 2 结果与分析 | 第74-76页 |
| ·传统培养检测方法 | 第75-76页 |
| ·快速检测方法 | 第76页 |
| 3 讨论 | 第76-77页 |
| 4 本章小结 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-82页 |
| 全文总结 | 第82-84页 |
| 附录 | 第84-88页 |
| 致谢 | 第88-90页 |
| 攻读学位期间发表文章 | 第90页 |
