| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-20页 |
| ·环糊精概述 | 第10-11页 |
| ·环糊精的组成与结构 | 第10页 |
| ·环糊精的功能与应用 | 第10-11页 |
| ·环糊精葡萄糖基转移酶（CGT 酶）概述 | 第11-13页 |
| ·CGT 酶的结构 | 第11页 |
| ·CGT 酶的功能 | 第11-12页 |
| ·CGT 酶在工业上的应用 | 第12页 |
| ·CGT 酶的产物特异性 | 第12-13页 |
| ·CGT 酶在基因工程菌中的发酵生产 | 第13-17页 |
| ·CGT 酶在基因工程菌中的发酵生产现状 | 第13-14页 |
| ·大肠杆菌重组蛋白表达系统 | 第14-15页 |
| ·大肠杆菌的分泌表达 | 第15-16页 |
| ·大肠杆菌的胞外分泌 | 第16-17页 |
| ·立题依据及意义 | 第17页 |
| ·本论文主要研究内容 | 第17-20页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第20-30页 |
| ·质粒和菌株 | 第20页 |
| ·试剂与仪器 | 第20-21页 |
| ·主要试剂 | 第20页 |
| ·主要仪器 | 第20-21页 |
| ·培养方法 | 第21页 |
| ·培养基 | 第21页 |
| ·种子培养 | 第21页 |
| ·摇瓶发酵 | 第21页 |
| ·分子生物学操作 | 第21-27页 |
| ·信号肽基因的获得 | 第21-22页 |
| ·细菌素释放蛋白（BRP）基因的获得 | 第22页 |
| ·定点突变 | 第22-23页 |
| ·胶回收目的片段 | 第23-24页 |
| ·克隆载体构建 | 第24页 |
| ·E. coli 化学感受态细胞的制备 | 第24页 |
| ·热激转化 | 第24页 |
| ·E. coli 电转化感受态细胞的制备 | 第24-25页 |
| ·电击转化 | 第25页 |
| ·质粒DNA 的提取 | 第25-26页 |
| ·质粒DNA 的酶切验证 | 第26页 |
| ·DNA 琼脂糖凝胶电泳 | 第26页 |
| ·目的基因与表达载体的连接 | 第26-27页 |
| ·分析方法 | 第27-30页 |
| ·菌体干重的测定 | 第27页 |
| ·E. coli 细胞中不同组分α-CGT 酶的制备 | 第27页 |
| ·α-CGT 酶环化活力的测定 | 第27页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测表达产物 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌细胞内膜通透性的测定 | 第28页 |
| ·大肠杆菌细胞外膜通透性的测定 | 第28页 |
| ·葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)活力的测定 | 第28页 |
| ·蛋白质浓度的测定 | 第28-29页 |
| ·重组α-CGT 酶的纯化 | 第29-30页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第30-56页 |
| ·信号肽对重组α-CGT 酶胞外分泌的影响 | 第30-38页 |
| ·信号肽基因的克隆 | 第30-33页 |
| ·信号肽对α-CGT 酶胞外分泌的影响 | 第33-34页 |
| ·IPTG 浓度对α-CGT 酶胞外分泌的影响 | 第34-35页 |
| ·重组α-CGT 酶在大肠杆菌中的分布 | 第35-36页 |
| ·分析与讨论 | 第36-38页 |
| ·细菌素释放蛋白的共表达对重组α-CGT 酶胞外分泌的影响 | 第38-46页 |
| ·细菌素释放蛋白基因的克隆 | 第38-41页 |
| ·BRP 蛋白表达载体的定点突变改造 | 第41-42页 |
| ·细菌素释放蛋白(BRP)与α-CGT 酶基因的共表达 | 第42-43页 |
| ·IPTG 浓度和诱导温度对共表达的影响 | 第43-45页 |
| ·BRP 蛋白共表达前后对重组α-CGT 酶胞外分泌的影响 | 第45-46页 |
| ·培养基添加剂对α-CGT 酶胞外分泌的促进作用 | 第46-56页 |
| ·不同培养基添加剂对重组α-CGT 酶胞外分泌的影响 | 第46-47页 |
| ·甘氨酸对α-CGT 酶胞外分泌的影响 | 第47-48页 |
| ·Triton X-100 对α-CGT 酶胞外分泌的影响 | 第48-49页 |
| ·甘氨酸和Triton X-100 协同作用对α-CGT 酶胞外分泌的影响 | 第49-51页 |
| ·重组α-CGT 酶的纯化及比活分析 | 第51-53页 |
| ·不同培养条件下α-CGT 酶在细胞中的分布 | 第53-54页 |
| ·甘氨酸和Triton X-100 强化α-CGT 酶胞外分泌的潜在作用机理 | 第54-56页 |
| 第四章 结论与展望 | 第56-58页 |
| ·结论 | 第56-57页 |
| ·展望 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-67页 |
| 附录:作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第67-68页 |
